煤炭液化真菌的鑒定及其對煤炭的液化

<>本刊特稿<>科技圖向導2011年第09期煤炭液化真菌的鑒定及其對煤炭的液化石開(kāi)儀陶秀祥洪芬芬(中國礦業(yè)大學(xué)化工學(xué)院江蘇徐州221008)摘要]本文從土壤中篩選出一株具有液化煤炭能力的真菌,通過(guò)形態(tài)觀(guān)察、185rDNA鑒定并構建系統發(fā)育樹(shù),發(fā)現該茵為Hyprocrea屬。[關(guān)鍵聞]煤炭液化;真茵;篩選;鑒定;188rDNA煤炭微生物液化是由于具有常溫、常壓和反應條件溫和等優(yōu)點(diǎn),受到廣泛關(guān)注-1。然而,該項技術(shù)未能廣泛地在工業(yè)中應用,其主要原因是微生物液化效率低明。本文主要從土壤中篩選出- - 株液化效果高. Hypocra loir tama157 (AB63714pHrpocreo ixi AH(FJ645728)的真菌,并對其進(jìn)行18S rDNA鑒定。1.實(shí)驗材料與方法21| p600[54廠(chǎng)1.1培養基Trchoderme sp V12z 0HQ730130.1)1.1.1篩選培養基:撫順煤粉15g, KH,P0.0.1 g, KHP0,0.1 g27Trichodema aureouride stain T119 (HQ5969581)MgS04-7H2O 0.04g, (NH)SO4 1.0g, NaCl 0.1 g, CaClh 0.01 g, H2O50 Ceorichum asspsses solate T180 (FJ9382921)1000 mL,瓊脂20 g。oos1.1.2 液化培養基:采用SMA培養基或SMB培養基,其組成見(jiàn)參圖1真菌AH的系統發(fā)育樹(shù)考文獻[4]。Figure 1 Phylogenetic tree of strain AH1.2篩選過(guò)程.2.4煤炭液化研究土壤中含有各種各樣的微生物,實(shí)驗中對撫順西露天煤礦附近土在SMB培養基中進(jìn)行煤炭液化研究,各密度級的液化率如表1壤、森林土壤枯枝敗葉中能液化煤炭的菌種進(jìn)行篩選。菌種篩選分兩所示。次進(jìn)行,首先，取土樣1 g,加入到帶玻璃珠的99 mL.去離子水中,即成表1真菌AH對不同密度級的撫順煤的液化率為10--2的稀釋液。吸取1mL稀釋液,均勻涂布到菌種篩選培養基上。Table 1 Liquefaction rate of different density coal放入28 C培養箱培養15d。將平板上長(cháng)出的菌種,在無(wú)菌工作臺中,用滅菌的接種環(huán)挑取少量菌絲,進(jìn)行劃線(xiàn)分離。密度/g*.cmr'殘煤/g液化率1%1.3菌種鑒定-1.30.99820.550444.86用試劑盒說(shuō)明書(shū)的步驟將真菌AH的DNA提取出來(lái)，然后對18S1.3-1.51.03350.841818.55rDNA進(jìn)行PCR擴增,再用瓊脂糖凝膠回收純化試劑盒(UNIQ-10)對1.5-1.71.04640.95358.88擴增產(chǎn)物中18S rDNA(800 kb)進(jìn)行純化,接著(zhù)進(jìn)行克隆,最后將白色菌落送往.上海捷瑞生物工程有限公司對18S rDNA進(jìn)行測序。利用1.19276.94BLAST對測序結果進(jìn)行比對,并利用Clustal x及Mega 4.0對菌株進(jìn)未分選煤1.0270 .0.855416.71行發(fā)育分析,并構建出系統發(fā)育樹(shù)。由表可見(jiàn),對于密度小于1.3g/em3的煤樣,灰分為3.33%,液化1.4煤炭液化研究采用SMB培養基進(jìn)行煤炭液化研究,先接種,再加入- -定量的不率為44.86%,可見(jiàn)篩選的菌種具有較高的液化能力。同密度級撫順煤,數天后分別對殘留煤炭進(jìn)行洗滌烘干溶煤殘留煤2.5液化產(chǎn)物分析粒。用加入的煤量減去殘留煤量,然后除以加人的煤量就得到液體液對煤炭生物液化產(chǎn)物的總離子流色譜圖與標準譜圖比對,其可能的主要化合物的質(zhì)譜圖及其結構式如圖2所示。圖中,油酸酰胺(化合采用agilent 6890 -5973N氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析液化產(chǎn)物的物7)是總離子流色譜圖中最大吸收峰所對應的化合物。其次是十三酰胺(化合物3).13-二氨基-N1.N1-二丁基-N3-萘基丙烷(化合物8)和組成。2.結果與分析24,7-三硝基- 9H-芴-9-酮(化合物1)。同時(shí),由圖2還可以證明,產(chǎn)物中也檢測到羧酸、酮、酯等結構,與紅外光譜分析的一-致。 此外,液化產(chǎn)2.1菌種篩選結果發(fā)現有4種真菌能利用撫順煤作為生長(cháng)碳源,其中真菌AH長(cháng)得物中，芳香化合物以1-3個(gè)芳環(huán)的為主,并且在芳環(huán)上有取代基團。最旺盛,其菌落直徑為7.4cm,而對照培養基中菌落直徑僅為1.4cm。因此選用真菌AH作為撫順煤液化微生物。為研究真菌AH對煤炭的作用,將其接種到SMA培養基中,觀(guān)察其形態(tài)的變化。發(fā)現前期菌絲為白色,后期變綠。同時(shí),將菌絲放在放大400倍的顯微鏡中觀(guān)察,以探索其菌絲形態(tài)產(chǎn)孢子情況等。形態(tài)上觀(guān)察,菌株的菌絲為對生分枝,白色透明。孢子梗尖端分生孢子,產(chǎn)生大量孢子。孢子呈球形,透明或半透明,無(wú)隔。從形態(tài)上判斷真菌H.lixiiAH為半知菌亞]叢梗孢目木霉屬。2.3 18S rDNA系統發(fā)育樹(shù)分析真菌AH的18S rDNA序列已提交至基因庫(序列號為.目o0人δ3目ooFJ645728), 構建的系統發(fā)育樹(shù)如圖1所示。由圖可知，真菌AH與Hypocrea lixii tama 157 (AB563714)有 很高的相似性,其同源性系數圖2煤炭液化產(chǎn)物中檢測的幾種主要化合物達到100%。因此,真菌AH命名為Hypocrea lixii AH。Figure 2 Main compounds detected from GC- -MS(下轉第28頁(yè))中國煤化工MHCNMH G基金項目:國家自然科學(xué)基金資助(50374068);國家自然科學(xué)基金委員會(huì )創(chuàng )新研究群體科學(xué)基金資助項目(50921002);中國礦業(yè)大學(xué)科技基金資助(E200407); 宿州學(xué)院碩士科研啟動(dòng)基金資助項目(2009YSS11).1 1..2011年第09期科技圖向導<>高教論述<>響,即三張報表之間計算口徑的不一致,降低了財務(wù)數據的可比性與的改革是可行的,必須的。同時(shí),我們還應該看到,我國2006年頒布的可靠性。會(huì )計準則已實(shí)質(zhì)性趨同或等效于國際會(huì )計準則，且通過(guò)對2007年和根據《財:務(wù)報表列報的初步觀(guān)點(diǎn)(討論稿)》的觀(guān)點(diǎn),對海爾公司的2008年新會(huì )計準則運行情況的調查統計，財政部和證監會(huì )對新準則財務(wù)報告的數據進(jìn)行調整,得到表4。的執行情況總體上持肯定態(tài)度。在這種情況下,我國上市公司的財務(wù)表4青島海爾股份有限公司2007- -2009 年調整后財務(wù)數據報告如果采用新的列報模式,企業(yè)需要耗費巨大成本,并對現有體系項目2007年.2008年2009 年進(jìn)行全面調整,還需對會(huì )計人員進(jìn)行培訓轉換成本很高。同時(shí),由于新的列報模式，需要提供更多細節的分解信息,也增加了8常的運行凈經(jīng)營(yíng)資產(chǎn)4.08.66.477.64 5,.408.039,928.18 2,061.974.011.7成本。因此,目前我國不宜立即進(jìn)行財務(wù)報告制度的改革,應堅持漸進(jìn)凈金融資產(chǎn)| 24.434.05.66 207485.96.88 7503726.472.97式改革的思路，努力做到財務(wù)報告制度和國際財務(wù)報告準則實(shí)質(zhì)的、持續的趨同。| 凈經(jīng)營(yíng)資產(chǎn)增長(cháng)率15.86%-1.65%我們還應該認識到,趨同不是單方向的靠攏,對于這場(chǎng)變革,我國凈金融資產(chǎn)增長(cháng)率-61.87%239.92%要利用國際金融危機后西方世界全面反思金融監管體制和財務(wù)監督注:數據來(lái)源于EMIS數據庫機制的有利機會(huì ),努力使國際財務(wù)報告準則的改革過(guò)程充分考慮我國結合表3和表4,我們可以更清晰地看出,海爾公司2008年和實(shí)際情況， 并將我國的成功經(jīng)驗變成國際公認的準則,不斷提高我國2007年相比,資產(chǎn)的增加主要是由于經(jīng)營(yíng)資產(chǎn)的增加;而2009年和企業(yè)會(huì )計行業(yè)和組織機構在國際財務(wù)報告組織框架內的話(huà)語(yǔ)權?？?008年相比,雖然資產(chǎn)增長(cháng)了80.41% ,但是這主要是由于金融資產(chǎn)的增加。[參考文獻]對比現行財務(wù)報表和按照分類(lèi)列報調整后的財務(wù)報表數據,我們[1]溫青山,何濤.基于財務(wù)分析視角的改進(jìn)財務(wù)報表列報效果研究一來(lái)自中可以看到,現行的財務(wù)報表只能消極的揭示資產(chǎn)的變動(dòng)情況,無(wú)法揭石油和中石化的實(shí)例檢驗.會(huì )計研究,2009,10: 10-17.示這種變化的原因及對公司經(jīng)營(yíng)的持續性影響,而分類(lèi)列報改革后的.[2]孟完巨.基于企業(yè)價(jià)值的財務(wù)報表分析體系及改進(jìn)財會(huì )研究209,18.39-財務(wù)報表則可以動(dòng)態(tài)的顯示出資產(chǎn)變化的原因,從而提高財務(wù)報表的40.[3]李煦財務(wù)報表分析的局限性及對策探討財政監督,2009,8:28- 29.4.結論及建議[4]于建波.企業(yè)財務(wù)報表附注問(wèn)題的探討會(huì )計之友, 2009.14:24- 25.從以上的分析中,我們可以看到,財務(wù)報表分類(lèi)列報從理論上可[s]王仲兵論財務(wù) 報表列報方式變革:動(dòng)因.挑戰與趨同路徑上海立信會(huì )計學(xué)以加強財務(wù)報表之間的聯(lián)系,提高信息對報表使用者的價(jià)值,可以幫院學(xué)報2010.24(1):48- 53.助報表使用者更好的決策;另-方面 ,在經(jīng)濟全球化、- -體化的背景[6]張金若,宋穎.關(guān)于企業(yè)財務(wù)報表分類(lèi)列報的探討，會(huì )計研究，2009.9:29 -35.下，國際經(jīng)濟交流日趨頻繁，為降低財務(wù)信息理解與利用成本促進(jìn)資[7]ASB.D. ri Paper Peimin Views " Fim inl Sue Prrlainn本跨區域流動(dòng),客觀(guān)上需要-套統- -的財 務(wù)報表格式。因此,財務(wù)報表" "w iboara20(-上接第13頁(yè))計算如下:溢價(jià),無(wú)風(fēng)險利率等綜合計算得出。為簡(jiǎn)化計算,本文用這-行業(yè)平均(1)稅后凈營(yíng)業(yè)利潤確定收益率5.67%代替。①利潤總額:142萬(wàn)元(3)該單位所占用的全部資本的機會(huì )成本: .②非經(jīng)常項目涉及的金額:5000x4.17% +6000x5.67%=548.7萬(wàn)元。補貼收人本年度為0(4)綜上,該單位2009年的EVA數據為:營(yíng)業(yè)外收支凈額. -10萬(wàn)元294 -548.7= -254.7萬(wàn)元合計:-10萬(wàn)元.從計算結果可以看出:只看利潤,該單位經(jīng)營(yíng)業(yè)績(jì)表現不錯。但采③本期利息費用(利息支出)為:240萬(wàn)元用EVA指標,考慮了股東資本和債務(wù)資本的機會(huì )成本后,考核結果就④當年創(chuàng )造的稅后凈營(yíng)業(yè)利潤為:截然不同了。導致EVA小于會(huì )計利潤的原因很多,其中很重要的一一點(diǎn)(142+10+240)x(1- -25%)=294萬(wàn)元就是企業(yè)在經(jīng)營(yíng)過(guò)程中對債務(wù)成本以外的機會(huì )成本(如股權成本)或(2)占用資本的機會(huì )成本是自有資金成本的重視程度不足。報業(yè)集團在對下屬單位的業(yè)績(jì)評價(jià)①生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)所使用的債務(wù)資本:中引入EVA指標,附帶建立以經(jīng)濟增加值為核心的薪酬激勵機制,可根據資產(chǎn)負債表中2009年數據:以促使下屬單位加以關(guān)注集團運營(yíng)資金投人的方向?？炊唐诮杩?000萬(wàn)元長(cháng)期負債2000萬(wàn)元,合計5000萬(wàn)元09年商業(yè)銀行短期借款利率:5.31%;長(cháng)期借款利率:5.94% ,可得:(3000x5.31%+2000x5.94% )+5000x( 1-25%)= 4.17%[1]孫娜EVA,企業(yè)業(yè)績(jì)評價(jià)的里程碑財會(huì )學(xué)2007(02).②生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)所使用的權益資本:[2 ]甘林君經(jīng)濟增加值(EV A)研究評述中國總會(huì )計師，2007 ,(08).[3]常永新傳媒集團公司治理北京:中國傳媒大學(xué)出版社2006.少數股東權益0、股東權益6000萬(wàn)元,權益資本合計6000萬(wàn)元[4 劉海貴中國報業(yè)發(fā)展戰略.世紀出版集團上海人民出版社.2006.權益成本的計算,-般根據行業(yè)選擇不同的貝塔系數、市場(chǎng)風(fēng)險一●(上接第11頁(yè))3.結論與討論Liquefaction of Untreated Hard Coal.Resour Consver Ree,1981 ,():251-260.實(shí)驗中,從土壤中篩選出的真菌具有將液化撫順煤液化成小分子礦業(yè)大學(xué)學(xué)報,20中國煤化工的能力，為該菌的工業(yè)應用奠定了基礎。[3]佟威,孫玉梅CNMHG響因素的研究I.煤炭轉化, 1996, 19(3):63YH[4]石開(kāi)儀,陶秀祥,尹蘇東等撫順褐煤的微生物溶煤J.中國礦業(yè)大學(xué)學(xué)報,330 27[1]Fakoussa R M.Production of water- -soluble Coal Substance by Partial Mierobial 2007 ,36(3):339-342.28.