白芍超聲提取工藝研究

表2含 Urease流出液成分分析CnA經(jīng) Sephadex G-50親和層析后比活提高流出液體積蛋白質(zhì)濃度66.13倍,比活達6976.83IUmg,得率為80.68%純度達到電泳純。220.212.5(onA純度鑒定純化樣品經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳得條蛋白帶,表明所分離純化的樣品已達1B.B.L. Agrawal,eta. pacific binding of concanavalin A到電泳純。rosslinked dextran gels. Biochem. J, 1965, 96: 26ConA分離純化結釆見(jiàn)表3。2中山大學(xué)生物系生化微生物學(xué)教研室,生化技術(shù)導論表3CoMA分離純化結果北京:人民教育出版社,1978:2053 B B L. Agrawal, et al. Isolation of concanavalin A by specific分離步驟白質(zhì)得率CH得率比活力純化倍數adsorption on cnss linked dextran gel. Biochem Biophys.ActH洋刀豆豆子100105.50.00緩沖液提取68.859.724 Irvin E. Liener. 'The photometric determination of the h:mag微濾65.2685,09137.561.30glutinating activity of soyin cnide soybean extracts. Arch親和層析686976.8366.13Biochem. biophys. 1955. 54: 223洋刀豆豆子屮CnA經(jīng)緩沖液提取,微濾澄清5蔣傳葵,等.I縣酶的活力測定,上海:上?？萍汲霭嫔?1982:117后,經(jīng)兩次 Sephadex G50親和層析,純化的ConA血6 Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation凝比活提高66.13倍,得率80.68%。of microgram quantities of prolein utilizing the principle of3結論teinrdye binding Annal. Biochem 1976, 72: 248筆者用 Sephadex G50親和層析技術(shù)對洋刀豆7張業(yè)旺,等,超濾處理刺五加提取液.水處理技術(shù),提取液中ConA和 Urease進(jìn)行了分離并對ConA進(jìn)行2001,27(2):99了純化。Dhubis M Colorimetric method for determination of sugar and re-通過(guò)對提取液微濾預處理,料液的澄清度得到lated substance. Anal. Chem. 1956, 28: 350明顯提高,但ConA和Urae的活性分別損失9 Andrew C.pean.l. Serun protein electrophoresis in acry-6.20%和9.50%,蛋白質(zhì)損失5.21%mide gel: pattens from nomal human subjects. Scit預處理后提取液,經(jīng)過(guò) Sephadex G-50親和層析147:145l柱,可使提取液中ConA和 Urease得到完全分離(2002-07-21收稿)白芍超聲提取工藝研究R33 A廣州陳李濟藥廠(chǎng)(5I0290)林慶義汪世瓊摘要目的:探討用超聲提取法提取白芍中芍藥甙的工藝條件,為超聲提取在業(yè)生產(chǎn)中的應用積累參數方法:設計正交試驗,對白芍的超聲提取工藝進(jìn)行研究,確定最佳提取藝條件。結果:最佳T藝為川1-2m粒藥材,加10倍量水超聲提取兩次,每次90mina關(guān)鍵詞白芍芍藥甙正交試驗超聲提取白芍為毛茛科植物芍約 Pannonia lactifera Pall.劑,從而提高提出率,縮短提取時(shí)間,并且免去了高的十燥根,是最常用的中藥材之一,其主要有效成分溫對提取成分的影響。丙此超聲波作為提取的一種為芍藥甙、丹皮酚等。文獻報道白芍傳統水煎煮.手段,具有良好的應用前景。本實(shí)驗以白芍為研究藝中,芍藥甙損失率高達40%以上,白芍中芍藥對象,以其有效成分芍藥甙為指標,高效液相色譜法甙在生產(chǎn)過(guò)程中含量下降主要是受熱帔壞,因此,工測定其含量,對超聲提取白芍中芍藥甙的藝進(jìn)行藝過(guò)程中應盡量避免長(cháng)期高溫受熱。研究表明,利出立中的應川積累參數。用超聲波產(chǎn)生的強烈振動(dòng)高的加速度、強烈的空化中國煤化工效應、攪拌作用等,都可加速藥物有效成分進(jìn)入溶CNMHG司,經(jīng)鑒定符合中中藥材第25卷第10期2002年10月國藥典(1995年版·部)白芍項下規定。芍藥甙對表2正交試驗結果照品,購自屮國藥品生物制品檢定所。儀器: Shimu-實(shí)驗號ABCdaz lc10AD色譜儀, Shimudaz Lc-10AD泵,SPDD)含量(%)0A紫外檢測器(日本島津),CQX2536型超聲波清1.3650洗器(上海必能信超聲有限公司)。試劑:甲醇為色譜純(天津協(xié)和試劑));其它試劑均為分析純。2.31422方法與結果2.1測定方法2.1.1色譜條件:色譜柱 Turner C18(4.6×200mm1222335山l);流動(dòng)相:甲醇-水(40:60);流速:Imd/min;檢測23131223312232.18641.3273波長(cháng):230mm;柱溫:37℃2.1.2標準曲線(xiàn):配制系列不同濃度的芍藥甙標K15.83055.1569402145209準溶液各進(jìn)樣10d,以對照品溶液濃度為橫坐標,K25.46435.6685.82005.31峰面積為縱坐標繪制標準曲線(xiàn)(在18.8-94四/mnl485.35966.3495.599范圍內為一直線(xiàn)),回歸得方程:A=93457.987X-H0.94200.50992.32057479.508(r=0.999)。表3方差分析表2.13樣品含量測定:精密量取樣品液各5m加方差來(lái)源離差平方和s自由度均方F適量甲醇,振搖,濾過(guò),用甲醇定容至25m,用微孔A0.16330.081722.07作濾膜濾過(guò),照2.1.1所述色諧條件分別進(jìn)樣10μl,測B043920.02205.93P>0.05得芍藥甙峰面積,計算出樣品中芍藥甙含量C20.49)133.5P<0誤差e20.003722.1試驗因素水平:主要考察提取時(shí)間藥材粒和106度、加水量對芍藥甙提取率的影響,方案見(jiàn)表1。32從表3可以看出藥材粒度對結果影響最大表1試驗因素水平表超聲時(shí)間對結果也有顯著(zhù)影響,從經(jīng)濟、省時(shí)的塬則因素考慮,生產(chǎn)上應把藥材的粒度作為關(guān)鍵因素考察。水平A超盧時(shí)問(wèn)B加水量加水量對提出率沒(méi)有明顯的影響提取時(shí)加10倍量倍)C藥材粒度空白)水是最合適的。3.3本研究旨在對超聲提取的應用進(jìn)行數據積5~7累,文獻報道超聲波適川廠(chǎng)提取含生物堿、甙類(lèi)的藥材。因白門(mén)芍中芍藥甙受熱易分解,而超聲提取不需222工藝過(guò)程:取白芍2kg9份,分別按I4(34)加熱,故有可能減小芍藥甙的損失,從而可提高藥材正交表試驗,超盧提取兩次,合并提取液,濾過(guò),定的利用率。容得1-9號樣品液,測定芍藥甙含量,結果見(jiàn)表34超聲提取的影響因素很多,也十分復雜、表3時(shí)間和實(shí)驗條件,對超州波功率頻率、提取次數3討論劑和溫度等因素未作考察,尚待進(jìn)一步研究。3.1各因素對試驗結果的影響次序為C>A>B,在木實(shí)驗條作下最佳提取條件為A1B2C3,即用1~參考文獻nn粒度的約材,加10倍量的水超聲提取兩次,每次1黃夏敏,等,白芍在中成藥生產(chǎn)過(guò)程中芍藥甙含量變化90min。設定D為空項,R值較小,說(shuō)明A、B、C三者的研究,中藥新藥與臨床藥理,19%,9(4):236無(wú)交互作用。2002-07-17收稿中國煤化工CNMHG中藥材第25卷第10期200年10月