3-吲哚甲醇的抗腫瘤作用

華西藥學(xué)雜志2008 ,23(1) :044 ~047. WCL. P有較好的抑制生長(cháng)作用,而對正常細胞人胚肺成纖具有較好的體外抗腫瘤活性,但粗提物的ICx值偏維細胞MRC-05的細胞毒作用較弱,只在高濃度時(shí)大。經(jīng)過(guò)分離純化,得到白花丹醌,實(shí)驗進(jìn)-步研究(0. 273 g.L~')顯示較強的抑制生長(cháng)作用。了白花丹醌對乳腺癌細胞株( mda - mb -231)的抑表1 MTT 法測得白花丹醌對mda -mb -231及MRC -05的細制作用。眾多抗腫瘤藥物在殺傷腫瘤細胞的同時(shí)，胞的體外抑制效應(n=5)對正常細胞毒性也較大,實(shí)驗以人胚肺成纖維細胞Table 1 Inhibitory eftet of plumbagin on mda - mb - 231 and(MRC-05)作為正常細胞對照,擬探討白花丹醌對MRC-05 by MTT(n=5)正常細胞的細胞毒作用。結果顯示,白花丹醌對Mda mb-231 .MRC -05mda-mb-231細胞有較好的抑制生長(cháng)作用,而對C/g.L-'inhibitoy/%_ LCxo/gL-1 inibitory/% LCxo/g:LFT0.27372. s60. 01476. 450. 263MRC -05細胞毒作用弱。提示白花丹醌的細胞毒作0.13771.717.94用可能具有一定的選擇性,其機制值得進(jìn)-一步探討。0.06970. 395.940.03569.59-1.67參考文獻:0.01841. 03-2.53[1] 劉圓,鐘熠.高澤文,等.白花丹藥材的研究進(jìn)展[J].華西藥表2白花丹醌對mda - mb -231克形成的抑制作用(xs,n=5)學(xué)雜志,006,21(1);71 -73.Table 2 Inhibitory effect of plumbagin on mda - mb -231 by clo-[2]劉圓,劉超,顏曉燕，等.白花丹不同提取部位體外抗腫瘤及nogenic formation(x s,n =5)急毒研究[J].中國藥理學(xué)通報,2007 ,23(1) :257 -258.C/g:L-1Colonie/well Inibitory/%1Cg/g+ [3] 黃娟,王建偉,張古榮。胰島素-5-氟尿嘧啶偶聯(lián)物在體外的細胞毒性和細胞親和性[J].華西藥學(xué)雜志,2007 ,2(3):Control goup38.67x7. 642.31x10-23.67 +1.530.51s. 13 x10-3245 -247.1.16x10-211.00*7.21 71. s5[4] 曲巍,王立明,朱有華,等.曲古霉素A增強抗腫瘤藥物對膀5.80 x 10-317. 33士4.1655.18胱癌T24細胞的殺傷作用[J].中國藥理學(xué)通報,2007,232.90x10-327.00+8. 1930. 18(3):387 -389.1. 45 x10-33.33+8.62 18.98[$]陳奇. 中藥藥理研究方法學(xué)[M].第2版.北京:人民衛生出版社,006.1015.2討論收稿日期:2007 -05在前期研究中,白花丹的氯仿和石油醚提取物3-吲哚甲醇的抗腫瘤作用羅麗娜,余龍江,郭鳴,敖明章’(華中科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,湖北武漢430074)摘要:目的探討硫代葡 萄糖苷的降解產(chǎn)物3 -吲哚甲醇(IC)在體內外的抗癌活性,為十字花科蔬菜的防癌作用以及從蔬菜中篩選藥用成分提供理論依據。方法體內試驗以荷瘤小鼠實(shí)體瘤重、抑瘤率及對脾臟、胸腺指數的影響為指標，評價(jià)IC對S移植性肉瘤的抑制作用;長(cháng)期實(shí)驗在飲水中加入化學(xué)致癌劑甲硝基亞硝基胍( MNNC)，誘發(fā)小鼠前胃鱗癌及癌前病變，同時(shí)給予不同劑量IC進(jìn)行預防,觀(guān)察癌前病變和癌變發(fā)生率;體外采用MTT法,觀(guān)察IC對HeLa細胞增殖的抑制作用。結果IC在體內能明顯抑制實(shí)體瘤重,使荷瘤小鼠的脾臟和胸腺指數下降,表現出一定的免疫抑制作用;長(cháng)期試驗能明顯降低MNNG誘發(fā)的癌前病變和癌變發(fā)生率;在體外對HeLa細胞有明顯的生長(cháng)抑制作用,且作用隨藥物濃度增加而加大。結論IC具有一定的抗腫瘤活性。關(guān)鍵詞:3 -吲哚甲醇;抗腫瘤;硫苷中圖分類(lèi)號:R96文獻標識碼:A文章編號: 1006 -0103(2008)01 -0044 -04Experimental study on antitumor activity of indole - 3 - carbinolLUO Li-na, YU Long - jiang, GUO Ming, AO Ming - zhang*( College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China)作者簡(jiǎn)介:羅麗娜( 1981-)女,正攻讀天然產(chǎn)物化學(xué)專(zhuān)業(yè)的碩士學(xué)位。E- mil;amin0122@2 163. com*通訊作者(Correspondent author) ,E - mail: amz25@ 163. com第1期羅麗娜,等。3-吲哚甲醇的抗腫瘤作用4:Abstract: OBJECTIVE To investigte the antitumor activity of Indole -3 - carbinol (IC) , the hydrolytic products of glucosino-lates, in vrivo and in viro, and to ecreen medicine materials from diet vegetables and provide theory Bupport for the anticarcinogenicityof cruciferus. METHODS The inhibition eflet of IC to Sw cells in vivo was evaluated by the tumor weight of the mice bearing tumorand the tumor inhibition rate. The efcts on spleen and thymus were also observed. Long temm carcinogenesis model was induced byN- methyl - N'- nitro - N - nitrosoguanidine ( MNNG). The in viro anticancer eflet was studied by MTT assay. RESULTS It wasobtained that HeLa cells were obviously inhibited by the infuence of IC in wiro. And there was positive correlation between the inhibi-tory effect and IC concentration. Furthermore, the IC also had the anticancer activity to the Sipo cells of the mice bearing tumor. Thedeclining of spleen and thymus index indicated that IC had the efet of immunosuppressant IC can reduce the precancerous afectionsand cancer ratio in long term carcinogenesis experiments. CONCLUSION IC has some efect on inhibition of tumor.Key words: Indole - 3 - carbinol; Antitumor; GlucosinolateCLC number : R96Document code:AArticle ID: 1006 -0103(2008)01 -0044 -04硫代葡萄糖苷(硫苷)是- -類(lèi)廣泛存在于十字素(深圳華藥南方制藥有限公司,批號:N060502);花科植物根莖果實(shí)中的糖苷類(lèi)混合物,特別是蕓甲硝基亞硝基胍( MNNG,日本東京化成試劑) ;小鼠苔屬Brassica植物,包括各種卷心菜、椰菜、花椰菜肉瘤細胞株(S2o,華中科技大學(xué)同濟醫學(xué)院藥學(xué)和布魯塞爾苗芽。至今已發(fā)現120多種硫苷,在十院) ;人宮頸癌HeLa細胞(華中科技大學(xué)光電國家字花科植物中已鑒定出27種”。根據側鏈基團的重點(diǎn)實(shí)驗室傳代保株)。SPF 級昆明種小鼠[湖北省氨基酸來(lái)源不同,可將硫苷分為脂肪族、芳香族、吲實(shí)驗研究中心,許可證號:SCXK(鄂)2003 - 0007]哚族硫苷。硫苷本身是一一種較為穩定的化合物，但&古兼用,體重18~22 g。在芥子酶或胃腸道中的細菌酶的催化作用下，會(huì )發(fā)1.2 方法與結果生降解并生成多種降解產(chǎn)物1。文獻[]報道,吲哚1.2.1 IC 對同種移植性腫瘤的作用取接種于昆族硫苷中的3-吲哚甲基硫苷的降解產(chǎn)物3-吲哚明小鼠約7~10d的S腫瘤,無(wú)菌條件操作,剔除甲醇(IC)可預防癌癥的發(fā)生(圖1)。作者研究了包膜和壞死部分,選取完好的瘤塊,置玻璃勻漿器IC的體內、體外的抗腫瘤作用,以探討其用于治療內,加入適量生理鹽水,配制成瘤細胞懸液,細胞數癌癥的可能性。為1 x10' ~2x 10'.ml-' ,接種于同種異體小鼠前肢腋皮下,每只小鼠注射0.2 ml。之后動(dòng)物隨機分組，r s -6-D glucose^N-OSOj分籠飼養。制成實(shí)體型荷瘤模型。治療組ig供試.glucosinolateIndole -3 - ylmethyl glucosinolate液,qd;陰性對照組用水;陽(yáng)性對照組用環(huán)磷酰胺(CTX),隔日ip給藥1次。Sm荷瘤小鼠連續給藥~o10d,停藥次日,脫頸處死動(dòng)物,剝取瘤體組織、脾、N胸腺稱(chēng)重,計算腫瘤系數抑瘤率及臟器系數。Indole - -3 - carbinol采用組間:檢驗及方差分析,應用SPSS 12.0統圈1化合物的結構計軟件包進(jìn)行統計學(xué)分析。對S荷瘤小鼠的抑瘤Fig1 Structures of compounds作用和脾臟、胸腺重量的影響見(jiàn)表1。實(shí)驗結果顯示，IC對古小鼠S，有顯著(zhù)抑制作1實(shí)驗部分用,大小劑量的抑瘤率分別為36. 92%、34. 73% ;陽(yáng)1.1儀器、試藥與動(dòng)物性藥物環(huán)磷酰胺可明顯抑制腫瘤的生長(cháng)，抑瘤率為二氧化碳培養箱(美國NuAire);倒置顯微鏡51.5%。環(huán)磷酰胺具有免疫抑制作用,與陰性對照( COIC) ;酶標儀(芬蘭Wallac)。3-吲哚甲醇(IC,組相比,可使脾臟和胸腺系數降低，而大小劑量的Sigma公司,純度99% ,批號: 122190050) ;環(huán)磷酰胺IC也能使臟器系數降低,其中大劑量IC對脾臟的(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司,批號:06090521);溴抑制作用稍強于環(huán)磷酰胺。由于8古個(gè)體差異,在化二甲噻唑_二苯四氮唑( MTT , Amresco公司分裝);&荷瘤小鼠中、大、小劑量的抑瘤率相差較大,大劑DMEM培養基( Gibco公司) ;新生牛血清(杭州四季量的抑瘤率為41.13%。環(huán)磷酰胺對&小鼠免疫器青生物工程材料有限公司,批號:00201);二甲基亞官具有極顯著(zhù)抑制性,IC大劑量對胸腺也有極顯著(zhù)砜( DMSO,天津市大茂化學(xué)試劑廠(chǎng));青霉素鈉(華的抑制作用。北制藥股份有限公司,批號:S0509301);硫酸鏈霉1.2.2對化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)性動(dòng)物腫瘤的作用 取46華西藥學(xué)雜志第23卷.表1 IC 對小鼠SIm腫瘸和免疫器官的影響( mg.kg-' ,n=8)Table 1 Influence ofICon古早S1m sarcom mouse and immune organs (mg*kg-' ,m=8) .GroupeD古S1po sarcom mouse8S1go Barcom mousemg.kg-1 Tc/x10-3 lIr/% Oe spleenOe thymusTc/x10~ 3 I/% Oe spleenControl14.4x3.012.48146.82 1.954+0.48 19.3*4.712. 173+0.93 3. 568 +0.72IC209.4+26* 34.73 9. 861+2.221. 881+1.0916.0+4.317.229.958+2.44 3. 160+0. 126(9.1+1.1* 36.92 8.403+1.53 1. 897+0.3111.4+4.8* 41.13 11. 852+2.06 1. 841 +0.56*3(7.0+3.0*51.5 8.491+1.84 1.51 +0.85 11.7+4.1* 39.78 7.791+1.43" 1.220+0.21 "Compared with control group: *P <0.05, ** P <0. 01 ;Te means tumor coffcient;Ir means inhibition rate;Oe means organ coffcient120只小鼠,隨機均分為MNNG組;IC大、中、小三IC的6個(gè)濃度對HeLa細胞作用48 h后，與陰性對個(gè)劑量組。取1 g MNNG加1 L蒸餾水,避光用磁力照組相比,對腫瘤細胞都有顯著(zhù)的抑制作用,其中攪拌器攪拌約4 h,使之溶解成MNNG溶液,置4C200、250μumol.L-1劑量的生長(cháng)抑制率分別達到冰箱里避光冷藏。臨用時(shí)配成100 μg.ml~'稀釋76.52%和78.42%;與環(huán)磷酰胺組相比其抑制作用液，置棕色瓶中(外包以鋁箔避光),由小鼠自由飲明顯較強。IC為52. 38 μmol.L-' 。取,連續12個(gè)月。MNNG組于12個(gè)月后停藥,給自表3 IC 對HeLa細胞生長(cháng)的影響(48 h)(rs,n=6)來(lái)水4個(gè)月;IC大中、小劑量組飲水中MNNG用量Table3 Ettect of IC on HeLa growth (48 h) (xxs,n=6)和時(shí)間與MNNG組相同,分別按100、30、10 mg.DoeInhibitionTIC2/kg-' ig給藥,每周6次,共16個(gè)月。除實(shí)驗過(guò)程中μmol-L-1μumol.L-1自然死亡外,其余為有效動(dòng)物，均于16個(gè)月全部處0. 236 +0. 035死。處死動(dòng)物,全面檢查胃腸道,重點(diǎn)觀(guān)察胃。取全I100. 127 +0. 052 *46. 26%52.38.胃于大彎側剪開(kāi),繪圖或照相后,按0.2~0.4 cm寬.0. 135 +0.024**442. 81%度全部取材編號,10%甲醛固定,石蠟包埋,間斷連000. 152 +0.039 *35. 90%500. 142 +0.035 "39.84%續切片,HE染色。MNNG誘發(fā)小鼠前胃鱗癌的過(guò)0.055 +0. 021 **00 76. 52%程中所出現的增生性病變(角化亢進(jìn)、單純性增生、0.051 +0.020**800 78. 42%乳頭狀增生)、癌前病變(乳頭狀瘤、不典型增生)、CTX50 ug:ml-1 0. 173 0.018 "26. 95%癌變(鱗狀細胞癌)與文獻- -致(*]。 治療組的增生Compared with control group: *P<0.05, $* P<0.01 ;compared with性病變癌前病變、癌變數均低于MNNG組,差異有cnx goup:OP<0.05, 0OP<0.01顯著(zhù)性(P<0.05)(表2)。2討論表2 IC 對MNNG誘發(fā)小鼠胃癌前病變和鯖癌的抑制作用Table 2 Inhibition ot carcinogenests by IC on mice在體內實(shí)驗中，大劑量3 -吲哚甲醇(IC)對&Croups n Dose/mg.kg" 'Hyperplasia/% Precancerous/% Cancer/%δ小鼠Sμ腫瘤都表現出一定的抑制作用，且大、小Control 2800.092. 864. 326 10042.3*26. 9"11. s""劑量都具有免疫抑制作用。體外MTT實(shí)驗顯示IC27 3048. 1“37.0*22. 2對HeLa細胞具有明顯的生長(cháng)抑制作用,且抑制作29 1051.7*34. 5**24.1*用與藥物濃度呈正相關(guān)。Compared with control goup:*P <0.05,**P<0.01.IC可抑制致癌物與DNA的結合16,71 ,除表現出1.2.3 MTT 比色法測定IC在體外對HeLa細胞的抗機體誘導突變作用、抑制某些酶的活性外,還有抗作用參照文獻[5],采用培養 的對數生長(cháng)期的HeLa激素樣活性及抗細胞增生的作用。細胞,消化、收集細胞,計數,調細胞濃度5 x 10*.ml-' ,接種細胞190 μl在96孔板內。每孔加藥量參考文獻:10 μl,每種劑量6個(gè)平行孔。藥物作用48 h后,每.1] Troyer JK , Stephenson KK, Fahey JW. Analysis of glucosinolate孔加入10 μl MTT ,37C培養箱中培養4 h,棄上清,from broccoli and other ouciferue vegetable by hydrophilic inter-每孔加150μl二甲基亞砜,微量振蕩器振蕩5min,action liquid chonatography[J]. 1 Chronatogr A,2001 ,919:299 -304. .自動(dòng)酶標讀數儀比色(波長(cháng)570 nm)。求出生長(cháng)抑[2] Yuesheng z. Cancer - preventive ioohiocyanates: mesurement制率( IR)和半數抑制濃度(ICs)。of human exposure and mechanism of action[J]. J Mutation Re-采用組間t檢驗及方差分析,應用SPSS 12.0統search. ,2004 ,55:171 -190.計軟件包進(jìn)行統計學(xué)分析(表3)。實(shí)驗結果顯示[3] Nugon - Baudet L,Rabot s, Wal JM,a al. Actions of the intesti-