聚乙二醇對人源ABO定型血清效價(jià)的影響

第四軍醫大學(xué)學(xué)報990240第四軍醫大學(xué)學(xué)報舊萬(wàn)冂數據資源系統JOURNAL OF THE FOURTH數穿化期刊WANFANG DATA CHINAINFO)MILITARY MEDICAL UNIVERSITY DIGITIZED PERIODICAL1999年第20卷第2期Vol.20No.21999聚乙二醇對人源ABO定型血清效價(jià)的影響楊世明楊棖林關(guān)鍵詞∶聚乙稀二醇類(lèi);定型血清ABO血型系統;效價(jià)中圖號:R457.11文獻標識碼:B0引言實(shí)驗觀(guān)察與應用表明聚乙二醇(PG)能增強酶法配血和間接抗人球蛋白試驗的敏感性,縮短了配血試驗和不完全抗體的檢測時(shí)間[1].為了解PEG能否提高人源ABO定型血清的效價(jià)我們用PEG濃縮人源ABO定型血清,對PEG不同分子量、不同濃度、不同濃縮時(shí)間和溫度對血清效價(jià)的影響,以及濃縮后不同層次的血清效價(jià)進(jìn)行了實(shí)驗比較和應用.材料和方法1試劑與器材PEG試劑,日本進(jìn)口天津天秦精細化學(xué)品有限公司分裝,批號930109pH7.O磷酸鹽緩沖液(PBS),兕八生理鹽水,單抗血清.扭力天平,離心沉淀器,低溫離心機,水浴箱,玻璃試管和瓶子等.1.2實(shí)驗與應用方法收集獻血員化驗檢查肝功合格的標本血清,置4°C冰箱48h吸收冷凝集素,離心分離血清置56°C水浴箱30min滅活,用50mL幾新鮮紅細胞懸液測定原血清基礎效價(jià)上述血清加入等量PEG溶液混勻放15mn~60mn,3000mn離心10mn~30mn,棄去上凊液沉淀物按100饑加入生理鹽水稀釋,再測定濃縮后的血清效價(jià)、親和力和特異性,合格后置-20°C冰箱保存;將因故不輸的血液收集,低溫離心30min,分離血清置56°C水浴仉,以30o0r/min離心30min分離上層血清測定其效價(jià)、親和力和特異性后按上述方法濃縮..3結果判定測定PG濃縮前、后血清效價(jià)、親和力和特異性,所有試驗重復3次,測定10份標本濃縮后血清效價(jià)均增高2個(gè)滴度和積分均增加13以上判為效價(jià)提高.2結果21不同PG分子量對血清效價(jià)的影響將3種不同分子量的PEG粉劑均按200mLL濃度配制,加入等量血清攪拌濃縮分離血清測定效價(jià)結果顯示PEG-6千提高血清效價(jià)的效果非常明顯,PEG-1萬(wàn)和PEG-2萬(wàn)效果較差(表1)22PEG濃度對血清效價(jià)的影響用PBS將PEG-6千粉中國煤化工劑分別配成2004,150L和100的濃度用不同濃度的PEG溶閥限細機A業(yè)消品果表明150m的PEG濃度提高血清效價(jià)的效果最好(表2fle∥/ E Vak/dsiydxxb4/dsy9diy9902/990240hm(第1/3頁(yè))201032217:5101第四軍醫大學(xué)學(xué)報990240表1不同PEG分子量濃縮前/后效價(jià)的比較PEG分子量效價(jià)積分親和力/s2萬(wàn)32/323737>30/>301萬(wàn)32323737>30/>300.6萬(wàn)32/12837/85>30/<15表2不同PEG濃度濃縮前/后效價(jià)的比較PEG濃度/mLL1效價(jià)積分親和力/s20032/6437/59>30>2015032/51237/95>30<1010032323747>30/2523不同層次血清效價(jià)的比較將150 g/L PEG溶液與血清等量混勻30min后,300mnin離心30min測定不同層次的血清效價(jià)結果沉淀物效價(jià)為512積分95親和力<10明顯高于1/2和下1/3層的血清效價(jià)(表3)表3PEG濃縮后不同層次血清效價(jià)的比較血清層次效價(jià)積分親和力1/213下1/38>25沉淀物512<1024濃縮時(shí)間對血清效價(jià)的影響將PEG溶液與血清混勻,分別濃縮15min,30min和60min結果15min,30min效價(jià)均為256積分8360min效價(jià)為512積分95.25不同濃縮溫度對血清效價(jià)的影響將PEG溶液與血清混勻后分別置4°℃,22°C和37C濃縮結果4C效價(jià)512積分922C效價(jià)256積分83,37C效價(jià)128積分7126血清抗體特異性測定將濃縮后的定型血清分別與A型、B型、O型和AB型各10名獻血員紅細胞作凝集試驗證實(shí)特異性合格.3討論高質(zhì)量的ABO定型血清是正確鑒定血型確保輸血安全的前提近年來(lái)發(fā)達國家已有用單抗血清取代人源ABO定型血清的趨勢但國內該工作起步較晚且單抗血清還存在著(zhù)因其特異性強而只能判別一個(gè)抗原決定族,可能會(huì )使一些A、B亞型漏檢;因其濃度高就有大得多的機會(huì )與另一些非特異性分子發(fā)生假陽(yáng)性反應[2],以及單抗血清本身也易被細菌污染而造成血型誤定等缺點(diǎn)[3],目前還不能完全取代人源A中國煤化工寸人源ABO尤其是稀有定型血清進(jìn)行最適制備、保存和提高其效價(jià)的HCNMHG要意義.我們研究結果發(fā)現PG-6千及其150g/的濃度提高血清效價(jià)的效果最明顯PEG提高人源ABO定型血清效價(jià)可能與血清抗體是免疫球蛋白,PEG是線(xiàn)形大分子物fle∥/ E Vak/dsiydxxb4/dsy9dy9902/990240hm(第2/3頁(yè))201032217:5101第四軍醫大學(xué)學(xué)報990240質(zhì),具有極強的親水性加入反應體系后經(jīng)離心力的作用致使血清蛋白濃縮和沉淀[4],從而顯著(zhù)提高血清效價(jià)我們先后收集A,B型血清各8α0m(效價(jià)32),用此方法濃縮后,血清效價(jià)均提高到256~512積分83~95親和力8s~12出現凝集,3min時(shí)凝塊大于1.5mm2經(jīng)與傳統方法制備的ABO定型血清和單抗血清進(jìn)行8000余人次的試驗比較,同時(shí)用PEG溶液作陰性對照結果符合率為100%用PEG濃縮法提高人源ABO定型血清效價(jià)方法簡(jiǎn)便效果明顯不需特殊儀器設備,PEG容易購買(mǎi),毒性低長(cháng)期貯存不變質(zhì).此法具有廢物利用,節約血液資源降低成本費用,提高經(jīng)濟效益等優(yōu)點(diǎn).作者簡(jiǎn)介:楊世明,男,43歲,主管技師作者單位∶楊世明楊棖林第四軍醫大學(xué)唐都醫院輸血科陜西西安710038參考文獻楊世明楊棖林,洪炳灸聚乙二醇快速檢測不完全抗體及其應用.第四軍醫大學(xué)學(xué)報,1995;16(1):74752李振才.紅細胞血型及血型診斷試劑研究進(jìn)展.見(jiàn):全軍輸血專(zhuān)業(yè)管理委員會(huì )編輸血與輸血相關(guān)領(lǐng)域研究進(jìn)展北京軍事醫學(xué)科學(xué)出版社196:17-203方志明沈光趙桂珍.超濃縮法制備人源抗A血清定型試劑的質(zhì)量觀(guān)察.中國輸血雜志,1995:8(3):131-1324桂勇陳宏礎,黃天祿用PEG分離血清高密度脂蛋白膽固醇及其亞組份的方法學(xué)探討.臨床檢驗雜志,19875(4):170-172編輯王小仲收稿日期:199802-17;修回日期:1998-06-15中國煤化工CNMHGfle∥/ E Vak/dsiydxxb4/dsy9dy902/990240hm(第3/3頁(yè))201032217:5101