重樓水提工藝的初步研究

第29卷第1期云南中醫學(xué)院學(xué)報Vol 29 No. 12006年2月ournal of Yunnan College of Tradtional Chinese Medicine2.2006重樓水提工藝的初步研究年四輝,張赫名,鄭渝艷(云南中醫學(xué)院中藥學(xué)院,云南昆明650200)摘要:目的:探討重樓提取過(guò)濾難及水解的問(wèn)題;得到重樓總皂苷最佳提取工藝。方法:重樓水提取過(guò)程中加入酶A和復合酶B解決其過(guò)濾問(wèn)題;通過(guò)正交實(shí)驗考察提取時(shí)間、提取次數、提取溫度、溶媒用量、pH及藥材粒度對重樓總皂苷溶出的影響。結果:酶A酶B的交替使用可解決過(guò)濾難問(wèn)題,提取率提高2428%兩種酶的用量分別為酶A1ml/kg生藥,酶B2m/kg生藥;提取次數對重樓總皂苷的提取率有極顯著(zhù)性影響,粒度有顯著(zhù)性影響,其最佳提取工藝為粉碎成20目的藥材用倍量pH7的溶劑60℃提取3次,每次3h。結論:該工藝環(huán)保,可行關(guān)鍵詞:重樓;水提工藝;正交實(shí)驗中圖分類(lèi)號:R283.6文獻標識碼:A文章編號:1000-2723(2006)01-0013-04重樓 Rhizoma Phizoma paris系百合科重樓屬2方法與結果Paris多種植物的根莖,2000年版藥典和2005年版2.1標準曲線(xiàn)的制備藥典收載的重樓為百合科植物云南重樓 Paris精密稱(chēng)取105℃干燥至恒重的對照品9.6mg置Polyphylla Smith Var. yunnansis( franch.)10ml容量瓶中,甲醇溶解至刻度,配制成0.96mgHand.Maz或七葉一枝花P. Polyphylla Smith ml的標準品溶液。分別取標準溶液50,100,150,Var chinensis( Franch.)Hara的干燥根莖,具有消20,250,300,350,40,450l置10m容量瓶中,水腫止血清熱解毒涼肝定驚的功效,在傳統醫學(xué)上浴揮干溶劑加高氯酸溶解至刻度密閉,置水溶鍋主要用于各種瘡毒、蛇毒、癰疽,現代藥理研究表明65℃恒溫15min,取出后放冷至室溫,2h內于其具有抗癌、抗生育、抗徵生物鎮靜、鎮痛、止咳平408mm處以高氯酸為空白測定吸收率得回歸方程喘、止血等作用其主要藥效成分是重樓皂苷。由于A(yíng)=6.4×10-3+0.0189,r=0.993,藥物濃度在重樓中含有大量的淀粉膠質(zhì)蛋白,傳統提取工藝4.8~43.2g/ml成線(xiàn)性關(guān)系多為甲醇或高濃度乙醇提取。我們通過(guò)復合酶對重2.2樣品溶液的制備樓根粉進(jìn)行處理,然后水提取,可以很好的解決其難提取液濃縮,80℃以下減壓濃縮至干,稱(chēng)取相當以過(guò)濾的問(wèn)題同時(shí)通過(guò)正交試驗可以確定重樓的于4g生藥量的提取物,甲醇溶解洗滌至25m容量最佳提取工藝。瓶中定容至刻度,取50l溶液至10ml溶量瓶中,1材料與試劑照2.1項下測定含量。Ⅳ2450紫外分光光度計(日本島津),GOA2.3酶提取實(shí)驗研究型電熱真空干燥箱(天津產(chǎn)), eppendorF微量移液2.3.1酶A、酶B的用量考察槍(美國產(chǎn)), Precisa XSI25A型電子天平(瑞土產(chǎn)),酶A(北京北方生物工程有限公司),復合酶重樓中含有大量淀粉、蛋白質(zhì)和粘液質(zhì),加熱后易糊化,不僅影響重樓有效成分的溶出,也造成過(guò)濾(北京北方生物工程有限公司),滇重樓(云南白藥集極為困難。我們在固定工藝40目藥材粉加7倍量團武定GAP基地提供,經(jīng)鑒定為滇重樓的干燥根水微沸狀態(tài)下煎煮3h,以過(guò)濾的難易程度及重樓皂莖),重樓皂苷1(中科院昆明植物研究所,高氯酸苷提取率為考察指標,重點(diǎn)考察了酶A用量酶B(分析純成都金山化工),高純水(自制,電導率≤用量。cm中國煤化工CNMHG收稿日期:2005-10-09作者簡(jiǎn)介:年四輝(1978~),男,安微懷運人,云南中醫學(xué)院203級研究生,研究方向:中藥資源開(kāi)發(fā)與利用。2006年云南中醫學(xué)院學(xué)報第29卷表1實(shí)驗方案和結果試驗號酶A用量(ml/kg生藥)·酶B用量(ml/kg生藥)過(guò)濾狀況總皂苷提取率(%較難濾54.681234567123123可濾61.27可濾62.511222可濾60.26易濾易濾58.96易濾易濾易濾45.33實(shí)驗中發(fā)現隨著(zhù)酶A酶B用量的增大,藥材表3酶因素對過(guò)濾和重樓皂苷提取率的影響的過(guò)濾改善比較明顯,考慮生產(chǎn)成本,故在保證過(guò)濾項目過(guò)濾情況重樓皂苷提取率(%)效果的前提下,酶A用量以1ml/kg生藥,酶B以未加酶難濾2ml/kg生藥為宜,結果見(jiàn)表1。酶A難濾74.182.3.2加酶溫度的考察酶B難濾由于酶都是蛋白,溫度對其穩定性和活性影響酶A+酶B易濾84.24很大。溫度越低,酶越穩定但活性降低,溫度既能加快酶反應的速度,也能導致酶失活變性,所有的酶都表3可以看出,加酶A的溫度對藥液的過(guò)濾有一個(gè)適合的溫度。本實(shí)驗中,酶A是高溫酶酶B沒(méi)有影響,而加酶B的溫度對藥液的影響較大,因是低溫酶,因此在上述實(shí)驗的基礎上分別從不同的此酶A可以在80℃左右加入,酶B可在藥材煮提后溫度考察溫度對酶活性的影響,結果見(jiàn)表2。冷至50℃加入,可使酶A、酶B的活性保持最大。表2加酶A酶B溫度對藥液過(guò)濾的影響實(shí)驗中發(fā)現,單用一種酶不能解決其過(guò)濾問(wèn)題,而兩種酶聯(lián)合使用可使藥液易濾,并可大幅提高重樓皂加酶A溫度加酶B溫度過(guò)濾情況過(guò)濾情況苷的提取率(C)2.4重樓提取工藝的實(shí)驗研究難濾難濾0089在解決了重樓過(guò)濾問(wèn)題后,采用正交實(shí)驗對可難濾難濾0000可濾能影響重樓皂苷溶出的因素進(jìn)行了考察,見(jiàn)表4、易濾難濾可濾表4正交實(shí)驗因素、水平表因素提取時(shí)間(h)提取次數提取溫度溶媒用量(倍)H值粒度(目)E573TH中國煤化工CNMHG第1期年四輝,等:重樓水提工藝的初步研究表5實(shí)驗設計與數據分析列號A提取物總皂苷總皂苷H質(zhì)量(g)質(zhì)量(m)提取事(%)實(shí)驗號(空白)96.62045.12323123232.1163.2752345145.72068.4194.7652.0160.190231.6107.52050.4822.0147.36569.1921.7183.23086.022345678231312231323312312231123311.5130.57561.301.4142.30066.8121.1122.91057.2122322.1177.24083.311.2116.4954.69191.94590.12200.915139.963121.209158.194141.574145.938126.052141.247k2138.526146.925140.998147.585156.624155.124153.614R19.385405720.9866.0112.8629.79112.367粒度是顯著(zhù)性因素;考慮到粒度過(guò)細可能導致過(guò)濾表6重樓總皂苷方差分析表困難,且F因素2水平與3水平幾無(wú)差別,即采用3因素偏差平方和自由度F比F臨界值顯著(zhù)性水平,故重樓總皂苷的最佳提取工藝為提取時(shí)間1399.91523.8126.90B3F2E2C1A3D2,即粉碎成20目的藥材用7倍量pH7的溶劑60℃提取3次,每次3h提取次數6662.130218.14318.000F<0.01根據以上實(shí)驗分析,我們做了3次驗證實(shí)驗,重提取溫度1500.97724.0886.溶媒用量6.71920.3726.940樓總苷的含量是184.834,182.406,185.132mg,提pH值1559.69924.4276取率為86.78%、85.64%、86.92%粒度3392.218296.940F<0.052.5重樓皂苷的索氏提取實(shí)驗誤差34.41取重樓40目粉4g,100ml甲醇提取8h,過(guò)濾,空白597.092濾液濃縮轉移至25ml容量瓶中,取50μ至10ml容量瓶中,按照2.1.2項下測定含量,重樓中重樓皂從直觀(guān)分析也可看出,RB>RF>RE>RC>苷含量為5.33%(n=3)。RA>RD,影響因素從大到小依次是提取次數、粒3結論和小結度、pH值、提取溫度、提取時(shí)間、溶媒用量,其中溶中國煤化工特定的非目標成媒用量最不明顯。由方差表可以看出影響提取物分淀CNMHG以很好解決重樓中重樓總皂苷的含量的極顯著(zhù)性因素是提取次數,總皂苷生廣過(guò)程中過(guò)漶題,同時(shí)可以提高重樓2006年云南中醫學(xué)院學(xué)報第29卷總皂苷的提取率。預實(shí)驗表明酶A、酶B加入的先和后續工作的方便第1次我們選擇7倍量水第2后順序同樣可以解決開(kāi)始的過(guò)濾問(wèn)題,同時(shí)對重樓次和第3次我們選擇5倍量,對重樓提取率影響甚總皂苷的提取率幾無(wú)影響,考慮實(shí)際提取工作的連微。本工藝用水作溶劑,不僅環(huán)保,亦可降低生產(chǎn)成續性,故我們選擇先加酶A后加酶B。單用1種酶本,溶劑用量少,可為后續工作提供方便?？梢圆糠指纳七^(guò)濾問(wèn)題并能提高重樓皂苷得率,但兩種酶聯(lián)合使用可很好的改善過(guò)濾,可大幅提高重[參考文獻]樓皂苷得率。薄層層析亦表明,酶的加入并沒(méi)有改]鄭虎占.中藥研究與應用M北京學(xué)苑出版社,198341變重樓皂苷的成分[2]徐學(xué)民鐘熾昌熊治平.重樓皂甙成分的含量測定研究溶劑用量對重樓總皂苷的溶出率影響不大,可J].中草藥,1986,17(11):13-14.能是酶的加入對其影響較大?？紤]到實(shí)際工作狀況(編輯:左媛媛)Studies on Water-extracting Technology From Rhizoma ParisNIAN Si-hui, ZHANG He-ming, ZHUO Yu-yanFaculty of Traditional Chinese Pharmary, Yunnan College of TCM, Kunming Yunnan 650200 ChinaABSTRACT: Objective: To resolve the question of filtrating in water-extracting from Phizoma paris: toget the best water-extracting Technology of the total Paris Steroid Glycosides(TPSG) Methods: mixingenzyme A and enzyme B during the process of water-extracting: explore time endurance,timestemperature, the amount of solvent pH and the size of particle by orthogonal experiment. Result: Theextracting-rate of TPSG improved 24. 28%, the amount of enzyme a is lml/ kg herbs, and the amount ofzyme B is 2ml/kg herbs. The best technology is following: 20 mu, 7 times water of pH7, extracting 3times at 60C, 3 hour every time. Conclusion: The technology is practicable.KEY WORDS: Rhizoma Paris; Water-extracting Technology; Orthogonal Experimaent(上接第9頁(yè))要臨床表現為消渴的癥狀,無(wú)論有無(wú)血醫學(xué),1997,18(9):619-621.糖的改變均可辨證為消渴,從消渴論治。在臨床中[5]陳瀕珠西醫內科學(xué).(第五版)M·北京:人民衛生出版決不可將二者等同起來(lái),而應針對具體的臨床情況社,2002804進(jìn)行治療,以取得最佳療效[6]趙凌云.1型糖尿病病因發(fā)病學(xué)進(jìn)展[J.四川生理科學(xué)雜志,1995,17(4):21-25參考文獻][7]郭月季,崔慶榮妊娠糖尿病的中醫病因病機探討[J].甘[1]王永炎中醫內科學(xué)(第六版)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)肅中醫學(xué)院學(xué)報,2004,21(1):21-22出版社,1991301[8]鄧傳賢糖尿病從肝論治芻議[冂.云南中醫學(xué)院學(xué)報,[2]張紅艷,李杰,閔秀全.2型糖尿病的病因遺傳學(xué)研究進(jìn)2005,28(3):19-21展[J].廣西醫學(xué),2004,3(26):361-363[9]郭渝南糖尿病病因病機探識[.實(shí)用中西醫結合臨床,3]王蘭英,高玉琪.2型糖尿病的脂代謝紊亂[J.《國外醫2002,2(2);52-54.學(xué)》內分泌學(xué)分冊,1995,15(4):185.(編輯:遲越)[4]徐亮,王家驥.2型糖尿病發(fā)病機理的研究進(jìn)展[門(mén)].廣東A Study on Comparing Diabets with Emaciation-thirst Disease of TCMLIANG Di-sai, XU Ye, SHI Xian-zhou. Advisor: HUANG Wen(Yunnan College of TCM, Kunming Yunnan 650200, China)ABSTRACT: Compared the difference and similaity of modern diabetes and emaciation-thirst Disease ofTCM in the aspects of the pathogenesis, clinical symptom and中國煤化工 dopt the diabetesand emaciation-thirst disease. The author explain that can't giCNMHGin the clinic, butshould combine the clinic carries on the treatment to thus obtaluKEY WORDS: Emaciation-thirst Disease: Diabetes: Eliminate and Research