熊果酸的生產(chǎn)工藝研究

江蘇農業(yè)科學(xué)2006年第4期135熊果酸的生產(chǎn)工藝研究李開(kāi)泉,劉水玲2(1宜春學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院江西宜春336000;2江西省宜春市袁州區疾病控制中心,江西宜春336000)摘要:釆用醇提凝析法提取分離枇杷葉中的熊果酸,用HPLC外標法測定其含量。熊果酸在4.6~23.0g范圍內線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9999),平均回收率為982%,產(chǎn)品純度在95%以上。僅以乙醇為溶劑,不僅簡(jiǎn)化了工序,而且提高了產(chǎn)品的安全性,較好地解決了利用枇杷葉為原料生產(chǎn)熊果酸的技術(shù)難題,并證明HPLC法是測定熊果酸含量準確可靠的方法,可用于熊果酸及其制品的質(zhì)量控制關(guān)鍵詞:熊果酸;生產(chǎn)技術(shù);工藝;枇杷葉中圖分類(lèi)號:R284.2文獻標識碼:A文章編號:1002-1302(2006)04-0135-02熊果酸( Ursolic Acid)為廣泛存在于植物界的1材料與方法五環(huán)三萜類(lèi)化合物,除醫藥上用于抗肝炎、抗腫瘤、抗菌消炎、降血糖血脂、增強免疫功能外,在日用化1.1材料、試劑、儀器與設備工、功能食品等方面也有重要用途-2)。熊果酸在陸英( Sambucus chinensis lindl)、甲醇(色譜純,植物界分布較廣,但其含量較低,目前國內外尚未實(shí)上海陸忠試劑廠(chǎng)),95%乙醇(食用級,廣西糖廠(chǎng));現人工合成因而研究熊果酸的制備技術(shù),對開(kāi)發(fā)熊活性炭(分析純,上海豪申化學(xué)試劑有限公司);熊果酸系列產(chǎn)品具有重要意義。果酸對照品,由中國藥品生物制品檢定所提供Waters-515型雙泵高效液相色譜儀,2996光電二收稿日期:006-01-26極管矩陣檢測器(美國); Perkin- Elmer傅立葉變換基金項目:國家“863”計劃項目(編號:2002AA2Z3217)紅外光譜儀(美國);顯微熔點(diǎn)測定儀(北京);WZZ作者簡(jiǎn)介:李開(kāi)泉(1954-),男,江西豐城人,研究員,教授,碩導1S數字式自動(dòng)旋光儀(上海)。主要從事天然藥物化學(xué)與新藥研究開(kāi)發(fā)。Te(0795)32019831;1.2試驗方法com。1.2.1制備方法與工藝將干燥的枇杷葉粉碎成也q生生qq生q也q也q也想q也也q也q也qq生(上接第134頁(yè))以看出,將多種防褐變劑合理復配將獲得更好的防考文獻褐變效果。[1]陶月良,邱君正,林華,等.板栗果實(shí)過(guò)氧化物酶與多酚氧化酶特性的研究[J].食品科學(xué),2001(5):6-673小結〔2]顧軍,王振斌,林琳,等.板栗罐頭加工工藝的研究[冂].食品科技,2003(7):28-30常溫反應系中板栗中的PPO在pH值4.0~[(3]段杉孫麗芹,姜愛(ài)莉,茶多酚在抑制板果褐變中的應用[6.0的范圍內具有很高的活性,殼聚糖對板栗的中國食品添加劑,1998(3):10-12PPO酶活有明顯的抑制作用,抑制效果隨殼聚糖濃[4] Wayne D, Jenkins,, Raleigh. Investigating the radical based graft度的增加以及脫乙酰度的提高而加強。polymerization of chitosan with Organohalide/Metal Complex RedoxCoinitiating Systems [D]. North Carolina State University, 2001殼聚糖對褐變的抑制與其對金屬的螯合性有[5] Marshall M, Kim J, Wei c. Enzymatic browning in f, vegetables關(guān)尤其是銅離子殼聚糖整合的C在反應體系 nd seafoods[ R.cnsi: d Science and Human Nutrition中的比例越大,對褐變的抑制效果越好of Florida 2000殼聚糖是很有潛力的天然防褐變劑,但板栗在6]Y中國煤化工Browning [D].Gaines-受熱時(shí)褐變比較復雜,若將殼聚糖大量應用于板栗CNMHG的加工中還需對溫度、時(shí)間和酸度等相關(guān)工藝條件[7]都意英,趙光,涂若,等果中多酚氧化酶的性質(zhì)[].食進(jìn)行進(jìn)一步的研究。品與生物技術(shù),2003,22(1):7-11136江蘇農業(yè)科學(xué)2006年第4期粗粉(20目),用乙醇回流提取2次,每次1h,合并1.44×10,r=0.9999,表明當熊果酸進(jìn)樣量在46兩次提取液,減壓回收乙醇得浸膏。浸膏以水沉降~23.0嗎之間時(shí),線(xiàn)性關(guān)系良好。2次用“YCXY-1號”除雜劑處理除去脂類(lèi)類(lèi)脂2結果與分析類(lèi)及葉綠素等雜質(zhì),過(guò)濾,不溶物以乙醇溶解,加活性炭脫色,經(jīng)凝析分離、純化精制,烘干,得針狀結晶2.1樣品鑒定結果熊果酸3根據樣品的性狀鑒定、熔點(diǎn)測定、 Liebermann1.2.2樣品鑒定方法Burchard反應陽(yáng)性、與對照品共薄層層析其Rf值22.1性狀鑒定樣品為無(wú)色針狀結晶,不溶于致,鑒定樣品為熊果酸。經(jīng)進(jìn)一步測定其紅外光譜,水和石油醚,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙結果與熊果酸對照品的紅外光譜完全一致。綜合以醚等有機溶劑。[a]3+65°(c0.095,EOH),上理化性質(zhì)和光譜數據確定樣品為熊果酸3mp285~287℃,與熊果酸對照品混合熔點(diǎn)不下降。2.2含量測定結果2.2.2定性鑒別 Liebermann- Burchard反應:2.2.1樣品溶液的配制精密稱(chēng)取熊果酸樣品取熊果酸樣品約2mg,以1ml95%乙醇溶解,吸取5.25mg,置于5ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至熊果酸乙醇溶液1滴置試管中,加醋酐試劑1ml,刻度,搖勻,溶液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后作為搖勻,沿試管壁緩緩加入濃硫酸試劑1m,在醋酐與樣品溶液。濃硫酸界面上呈現紫紅色圓環(huán)。2.2.2樣品測定取3批熊果酸樣品,用微量注射1.22.3薄層層析鑒定取硅膠G,加0.5%的器吸取10μ進(jìn)樣分析,每批重復進(jìn)樣5次。測得cMC-Na制成硬板,晾干后于110℃活化1h備批樣品中熊果酸的平均含量分別為99.62%、用。取熊果酸樣品約2mg,加1m95%乙醇溶解,99.54%、99.58%。點(diǎn)樣,同時(shí)用熊果酸對照品作對照,以環(huán)己烷:丙酮(3:1)為展開(kāi)劑,展距10cm,晾干,噴以10%硫酸3討論乙醇溶液,于110℃加熱5-10min。結果在與對照熊果酸在植物界分布雖廣,但其含量較低,提取品相應的位置上顯相同顏色的紫紅色斑點(diǎn),在365分離難度大。國內外普遍采用Al2O3硅膠等柱層nm紫外光下顯相同顏色的金黃色熒光斑點(diǎn)。析法進(jìn)行微量制備,需使用氯仿、甲醇等有害溶劑,1.2.2.4紅外光譜鑒定樣品IRmv(cm-1):不僅操作復雜制備量小,而且溶劑消耗大、成本高、3434(-0H)296829272871(C-H)、1694(C安全性差,難以實(shí)現批量生產(chǎn)。本制備技術(shù)僅以乙=0)、1456、1384(CH3)、1031(C-0)。醇為溶劑,未加用其他有機溶劑,不僅簡(jiǎn)化了程序,12.3樣品熊果酸含量測定方法聞還提高了產(chǎn)品的安全性。醇提凝析法較好地解決了1.2.3.1色譜條件 Symmetry Shield RP-18色譜熊果酸制備過(guò)程中有關(guān)除雜純化等技術(shù)難題。采柱(39×150 mm column,美國 Waters公司),柱溫用自創(chuàng )的“YCXY-1號”除雜劑,不僅能有效去除脂25℃,流動(dòng)相為甲醇-水(88:12),流速1m/min。類(lèi)類(lèi)脂類(lèi)及葉綠素等雜質(zhì),而且有利于熊果酸的富1.2.3.2波長(cháng)確定熊果酸在流動(dòng)相中的紫外吸集和純化,其純度在99.8%以上。收光譜顯示其最大吸收波長(cháng)為202.2mm,但溶劑甲參考文獻:醇在短波長(cháng)處亦有吸收,為減少干擾,且不至于降低靈敏度,故確定210mm為檢測波長(cháng)。[1]陳武,李開(kāi)泉,熊筱娟.陸英抗肝炎活性成分的研究[J]南昌1.2.3.3溶液配制對照品溶液精密稱(chēng)取熊果酸大學(xué)學(xué)報,2001,25(2):165-167對照品575mg,置于5ml容量瓶中,用甲醇溶解并[2]宋京張慶林、熊果酸藥理作用研究進(jìn)展[冂].中草藥,199930(增刊):196-19稀釋至刻度搖勻制成含熊果酸1.15mg/ml的對[3]李開(kāi)泉,陳武,葉文峰,等,陸英中烏索酸的分離與鑒定[照品溶液。中國煤化工23.4線(xiàn)性關(guān)系用微量注射器分別吸取熊果[4CNMHG應用M,北京:北京醫科酸對照品溶液4、8、12、16、20μ,按1.2.3.l色譜條件進(jìn)樣,測定峰面積。以峰面積對樣品進(jìn)樣量進(jìn)行5)鄒盛動(dòng).陳武,李開(kāi)泉,等陸英中烏索酸的分離與C測定線(xiàn)性回歸,得熊果酸回歸方程為Y=1.20×103X+