乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件

笫23卷第3期大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報vol, 23, No. 32004年9月Journal of Dalian Institute of Light IndustrySept. 200 4文章編號:1005-4014(2004)03019004乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件張羽飛,于春麗,張春枝(大連輕工業(yè)學(xué)院生物與食品工程學(xué)院,遼寧大連116034)關(guān)鍵詞:黃芩;黃酮;提取摘要:考察了水煎煮法、乙醇回流法、乙醇室溫浸提法對黃芩總黃酮得率和純度的影響。確定乙醇室溫浸提法的工藝條件為:50%乙醇室溫浸提3次,每次24h;酸沉溫度40℃;酸沉pH為0.5。該工藝穩定性好,黃芩總黃酮的平均得率為7.68%。中圖分類(lèi)號:R931.6文獻標識碼:AExtraction of flavones from Scutellaria baicalensis georgiwith ethanol under room temperatureZHANG Yu-fei, YU Chun-li, ZHANG Chun-zhi(School of Biological Foodstuff Engineering, Dalian Institute of Light Industry, Dalian 116034, China)Key words: Scutellaria baicalensis Georgi; flavones; extractionAbstract: The extraction of total flavones from Scutellaria baicalensis georgi by three different methodsstudied. The optimal extracting conditions are as follows: the powder of Scutellaria baicalensis Georgisteeped 3 times with 10 folds 50% of the ethanol for 24 h, precipitation of flavones is at pH 0.5 and 40CCompared with original process, the method is stable, the average yield of flavones is 7. 68%黃芩為唇形科植物黃芩( scutellaria正品黃芩 Scutellaria baicalensis georgi。uiculensis georgi)的干燥根,具有清熱燥濕,瀉火1.1.2試劑解毒,止血,安胎等功效1,是一種常用的傳統中黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素標準品購于Wako藥。黃芩總黃酮是黃芩主要有效成分。為適應中 Pure Chemical Industries,Ltd.(日本),薄層層析標準化、現代化的要求,釆用黃芩總黃酮替代黃板 silica gel60F2s4購于德國 Merck公司。乙醇芩飲片已成為發(fā)展趨勢。鹽酸、甲醇等均為分析純黃芩總黃酮的提取可采用水煎煮法2,3)、乙1.1.3儀器醇提取法4)、加助溶劑提取法5)、超聲波法6、超RE52A型旋轉蒸發(fā)器,數控超級恒溫槽,濾法微波提取法、高速逆流色譜法、亞臨界752型紫外可見(jiàn)分光光度計,NB型精密扭力天水提取法0等多種方法。但真正用于規?；?。生產(chǎn)的工藝主要有水煎煮法和乙醇提取法。作者1.2方法對水煎煮法、乙醇回流提取法和乙醇室溫浸提法1.2.1黃芩總黃酮含量的測定進(jìn)行了比較,并確定乙醇室溫浸提法的工藝條件,采用紫外分光光度法1l。被測樣品用70%檢驗了工藝的穩定性。乙醇溶解后作適當稀釋,測定279nm處吸光值材料與方法利用標準曲線(xiàn)計算黃芩總黃酮的含量。以黃芩苷作標準,70%乙醇作空白。材料1.2.2黃芩總黃酮成分的測定采用薄層層析法。以甲醇為溶劑配制黃芩飲片,購自大連市藥材公司。經(jīng)鑒定為1mg中國煤化工的黃芩總黃收稿日期:200408-23CNMHG作者簡(jiǎn)介;張羽飛(1980~),女,碩士研究生第3期張羽飛等:乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件酮樣品溶液,將上述對照品及樣品各1L依次點(diǎn)樣于薄層層析板( silica gel60F2s)上,于層析缸中1.0}y=0.0538x+0096展開(kāi),展開(kāi)劑為V(乙酸乙酯):V(丁酮):v(甲=0.9993酸):V(水)=10:7:1:1,取出吹干,紫外顯色。1.2.3水煎煮法提取黃芩總黃酮150g黃芩粗粉,水煎煮3次,水量是中藥量的10倍,時(shí)間均為1b,保持微沸狀態(tài)。脫脂棉過(guò)濾,合并濾液,濃縮至中藥量的10倍。用6mol濃鹽酸調濃縮液pH值為3.5,靜置60min,過(guò)濾p(黃芩苷)/(gmL)所得濾液升溫至40℃,調pH值1.5,保溫60min,室溫靜置24h,抽濾,沉淀用去離子水洗圖1紫外分光光度法測定黃芩苷含量至中性,再用少量95%乙醇洗滌,干燥器內干燥的標準曲線(xiàn)至恒重。1.2.4乙醇回流法提取黃芩總黃酮媒不同。由于黃芩總黃酮中的主要成分黃芩苷是150g黃芩粗粉,用10倍體積60%乙醇回流連有葡萄糖醛酸結構的黃酮衍生物,具有一定提取3次,各1h,濾液減壓回收盡乙醇后,用水定的脂溶性。因此,用乙醇作溶媒時(shí)溶出率更高。容至中藥量的10倍。余下操作過(guò)程同1.2.3。表1不同提取方法對黃芩總黃酮得率和純1.2.5乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮度的影響150g黃芩粗粉,用10倍體積60%乙醇室溫浸提24h,提取3次,濾液減壓回收盡乙醇后,用提取方法產(chǎn)品得率/%黃芩總黃酮黃芩總黃酮純度/%導率/%水定容至中藥量的10倍。余下操作過(guò)程同水煎煮法72.81乙醇回流法乙醇室溫浸提法85,471.2.6乙醇室溫浸提法工藝條件的選擇150g黃芩粗粉,醇浸后,將濾液蒸于制備浸乙醇室溫浸提法與乙醇回流法相比產(chǎn)品得率膏,對乙醇濃度、醇浸時(shí)間、料液比、醇浸次數進(jìn)行有大幅度提高,這是因為前者延長(cháng)了提取時(shí)間,提選擇。在此基礎上,再確定酸沉溫度、pH的控制高了黃芩總黃酮的溶出率。此外,乙醇室溫浸提條件法比回流法更適合工業(yè)化生產(chǎn)。1.2.7乙醇室溫浸提法工藝穩定性實(shí)驗2.3乙醇室溫浸提法工藝條件的選擇按照所選定的工藝條件進(jìn)行3次黃芩總黃酮2.3.1乙醇濃度對黃芩總黃酮得率的影響的提取實(shí)驗,檢測工藝的穩定性用不同濃度的乙醇對黃芩粗粉進(jìn)行室溫浸提。紫外分光光度法測定黃芩總黃酮含量,計算2結果與討論得率。結果見(jiàn)圖2。2.1紫外分光光度法測定黃芩苷含量的標準曲線(xiàn)釆用1.2.1方法測得黃芩苷含量的標準曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。標準曲線(xiàn)直線(xiàn)方程為y=0.0538x+0.0096,其中y為279m吸光值,x為黃芩苷含量(g/mL)。2.2不同提取方法對黃芩總黃酮得率和純度的影響釆用水煎煮法、乙醇回流法和乙醇室溫浸提06070法提取黃芩總黃酮,結果見(jiàn)表1。表1結果顯示中國煤化工黃芩總黃酮得率從高到底依次為乙醇室溫浸提CNMHG總黃酮得率法、乙醇回流法、水煎煮法。其中乙醇回流法和水的影響煎煮法均利用溶劑加熱提取,且時(shí)間相同,只是溶大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報第23卷圖2結果顯示,50%乙醇提取黃芩總黃酮得芩總黃酮4次,結果見(jiàn)表2。率最大,為13.22%2.3.2醇浸時(shí)間對黃芩總黃酮得率的影響表2醇浸次數對黃芩總黃酮溶出率的彩響采用50%乙醇作溶媒進(jìn)行提取,制備浸膏醇浸次數黃芩總黃酮溶出率/%測定各個(gè)提取時(shí)間下的黃芩總黃酮含量,計算得123477.8率。結果見(jiàn)圖3。表2結果顯示,2次提取可溶出77.8%的黃芩總黃酮,3次提取黃芩總黃酮的溶出率可達94.5%E9.52.3.5酸沉淀溫度對黃芩總黃酮得率的影響舉采用酸沉淀的方法提取黃芩總黃酮,各文獻中采用的酸沉溫度不同。一般在40~80℃不等。測定不同溫度下酸沉淀所得黃芩總黃酮,結果見(jiàn)圖5。圖3提取時(shí)間對黃芩總黃酮得率的影響圖3結果顯示,黃芩總黃酮在24h溶出率最大,為10.59%2.3.3料液比對黃芩總黃酮得率的影響料液比是黃芩飲片粗粉的質(zhì)量(g)與溶媒乙醇體積(mL)的數值之比。采用不同體積50%乙,剛醇室溫浸提24h,測定黃芩總黃酮含量,計算得率。結果見(jiàn)圖4圖5酸沉溫度對黃芩總黃酮得率的影響14在不同溫度下進(jìn)行酸沉淀,溫度越低,酸沉越慢;溫度越高酸沉速度越快,但沉淀物中混有大顆10粒雜質(zhì),80℃酸沉所得沉淀物表面有油狀物質(zhì)。由圖5可知,酸沉溫度為40℃時(shí)黃芩總黃酮得率劉§§氵最高,為3.68%。2.3.6酸沉淀pH值對黃芩總黃酮得率的影響1:0.61:0.81:10101:141:16料液比黃芩苷分子結構中C2上羥基易成鹽,而在酸性條件下黃芩苷分子就被還原出來(lái)12。酸沉時(shí)圖4料液比對黃芩總黃酮得率的影響的pH值對此反應有顯著(zhù)影響,測定不同pH條件圖4結果顯示,乙醇用量少時(shí),黃芩總黃酮浸下沉淀得到的黃芩總黃酮,結果見(jiàn)圖6。圖6結出不完全,當料液比為1:10時(shí),黃芩總黃酮得率果顯示,在pH05時(shí)沉淀黃芩總黃酮得率最大,達到最大,為17.39%。為5.69%。2.3.4醇浸次數對黃芩總黃酮得率的影響2.4乙醇室溫浸提法提取的黃芩總黃酮成分組成為保證中藥有效成分的充分溶出,通常采用采用薄層層析法(TLC)測定乙醇室溫浸提法多次提取法。但多次提取溶媒消耗量大,濃縮耗得到中國煤化工圖7可見(jiàn),黃次數十分必要。采用10倍量的50%乙醇提取黃品,另姒CNMH(于缺少標準能多,致使生產(chǎn)成本增高。因此,確定適宜的提取芩總直H鋸文獻[13]報第3期張羽飛等:乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件道,應該是漢黃芩苷。3結論(1)3種黃芩總黃酮提取方法中,乙醇室溫5浸提法明顯優(yōu)于水煎煮法和乙醇回流法(2)乙醇室溫浸提法工藝條件為:乙醇濃度*檢50%;室溫浸提3次;料液比為1:10;提取時(shí)間24h;酸沉淀溫度40℃;pH值0.5。4.8(3)乙醇室溫浸提法工藝條件和產(chǎn)品質(zhì)量穩定,黃芩總黃酮中主要成分為黃芩苷。1.5參考文獻:圖6酸沉pH值對黃芩總黃酮得率的影響[1]國家藥典委員會(huì ).中華人民共和國藥典:第1部[M]北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000.2482]周德慶,曾駱.黃芩總黃酮的提取工藝研究[J].華西藥學(xué)雜志,2002,18(1):79-80[3]韓魯佳,閻巧娟,江正強,等.黃芩甙提取分離方法及工藝研究[J].農業(yè)工程學(xué)報,2000,16(6):118-122[4]黎萬(wàn)壽,陳幸.黃芩苷提取工藝研究[J].中草藥[5]黃維安,蒙毅.黃芩甙提取、精制及含量測定的研究概況[J].中草藥,1996,27(增刊):240-242[6]郭孝武.超聲提取黃芩苷成分的實(shí)驗研究[J].中國1234現代應用藥學(xué)雜志,1999,16(3):18[7]李彤彤,李宏,候茂君,等.黃芩化學(xué)成分及黃芩苷1一漢黃芩素,2一黃芩總黃酮,3一黃芩素,4一黃芩苷提取方法研究進(jìn)展[J].天津藥學(xué),2002,14(3):7-8圖7黃芩總黃酮的TLC圖譜[8] LU HT, JIANG Y, CHEN F. Application of high-2.5乙醇室溫浸提法的穩定性peed counter-current chromatography to the preparative separation and purification of baicalin from the Chi由2.3的實(shí)驗結果,得到乙醇室溫浸提法的nese medicinal plant Scutellaria baicalensis [J].Chro-提取工藝,按照此工藝提取黃芩總黃酮,3批實(shí)驗matogr A,2003,1017(1-2):117-123結果見(jiàn)表3。[9]徐志宏,錢(qián)廣生,劉三康,等,黃芩中黃芩苷的亞臨界水提取及高效液相色譜分析[].色譜,2004,22(1)表3乙醇室溫浸提法的穩定性批次黃芩總黃酮得率/%偏差/%[10] IBANEZ E, KUBATOVA A, SENORANS F], et al0.52Subcritical water extraction of antioxicfrom rosemary plants[ J]. Agric Food Chem, 2003, 51(2):375-382[11]唐小明.紫外分光光度法測定清開(kāi)靈注射液中黃芩穩定性是評價(jià)中藥提取工藝的重要指標,也苷的含量[J].海峽藥學(xué),2001,13(1):33-34是實(shí)現中藥提取工藝標準化的必要條件。由表[12]郝秉軍,改進(jìn)酸沉工藝,提高黃芩總甙收率[].中數據可知,選定的乙醇室溫浸提法工藝比較穩定,成藥,1994,16(2):7-8黃芩總黃酮得率有所提髙。[13]肖培根,新編中藥志:第1卷[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000.865中國煤化工CNMHG