正交試驗優(yōu)選了哥王的提取工藝

208中草藥 Chinese Traditional and Herbal Drugs第38卷第2期2007年2月正交試驗優(yōu)選了哥王的提取工藝陳爽,邵曼莉,楊振宇,杜智敏(哈爾濱醫科大學(xué)附屬二院臨床藥物研究所,黑龍江哈爾濱150086)摘要:目的研究影響了哥王提取的各種因素,確定最佳提取工藝。方法采用正交試驗,考察乙醇提取次數、加醇量、醇體積分數、提取時(shí)間4個(gè)因素的影響,以乙醇浸膏收率、總黃酮的質(zhì)量分數、抗炎效果為指標優(yōu)選了哥王的乙醇提取工藝。結果在所考察的因素中,對乙醇浸膏收率、總黃酮的質(zhì)量分數、抗炎效果影響程度均為醇體積分數>提取次數>提取時(shí)間>加醇量。3方面因素,以抗炎效果為主要指標,確定最佳提取工藝為A1BC2D2,即75%乙醇10倍量提取2次,每次4h。結論本實(shí)驗采用的方法和指標適合于了哥王的提取關(guān)鍵詞:了哥王;總黃酮;抗炎;正交試驗中圖分類(lèi)號:R284.1文獻標識碼:A文章編號:0253-2670(2007)02-0208-03Optimum extracting technology of wikstroemia indica by orthogonal testCHEN Shuang, SHAO Man-li, YANG Zhen-yu, dU Zhi-min(Institute of Clinical Pharmacy, the Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Harbin 150086, ChinaKey words: Wikstroemia indica (L.Meyer; total flavones; antiinflammation; orthogonal test了哥王 Wikstroemia indica(L.)C.A. Meyer恒溫干燥箱(上海市躍進(jìn)醫療器械一廠(chǎng))。始載于《嶺南采藥錄》,為瑞香料蕘花屬植物,苦寒、昆明小鼠(哈爾濱醫科大學(xué)動(dòng)物中心)。微辛、有毒,清熱解毒、化痰散結、通經(jīng)利水,可用于2方法與結果治療扁桃體炎、腮腺炎、淋巴結炎、支氣管炎、哮喘、2.1因素水平的確定:采用L(3)設計實(shí)驗,以不肺炎、風(fēng)濕性關(guān)節炎、跌打損傷、麻風(fēng)、閉經(jīng)、水腫等同倍數的乙醇、提取次數、醇體積分數、提取時(shí)間為疾病1)。了哥王含有小麥黃素羥基芫花素酸性樹(shù)指標進(jìn)行比較,因素水平安排見(jiàn)表1。脂、揮發(fā)油、皂苷、多糖類(lèi)、黃酮類(lèi)等成分。其中黃酮表1因素水平類(lèi)成分有抗菌、抗炎、鎮痛等作用2;)。目前文獻報道Table 1 Factors and levels了哥王提取溶劑有水、石油醚、乙醇、甲醇等。了因素哥王對二甲苯所致小鼠耳部炎癥有抑制作用1。為水平A醇提次數B加醇量C醇體積分D提取時(shí)間探索藥材有效成分提取的最大化,本實(shí)驗用乙醇提/次/h取,乙醇浸膏收率、總黃酮質(zhì)量分數、抗炎效果為指4標,考察影響了哥王提取的主要因素,尋求最佳的提取工藝條件。2.2乙醇浸膏收率的測定:取了哥王粗粉50g,按1材料、試劑與儀器正交表中規定的條件進(jìn)行回流提取,提取液濾過(guò),回了哥王購自安徽亳州敬德藥業(yè)公司,經(jīng)哈爾濱收乙醇,濃縮成稠膏狀,干燥至恒重,得干膏,稱(chēng)質(zhì)醫科大學(xué)附屬二院臨床藥物研究所金瑞教授鑒定為量,計算醇浸膏收率。瑞香科蕘花屬植物了哥王W. indica(L.)C.A.2.3總黃酮的測定Meyer,取莖干燥粉碎后備用。蘆丁對照品購自中國2.3.1供試品溶液制備:精密稱(chēng)取正交試驗下的干膏藥品生物制品檢定所。其余試劑均為分析純。1g置錐形瓶中,用石油醚超聲脫脂3次,每次2h,棄紫外可見(jiàn)分光光度計(日本島津UV-2201去石油層。剩余殘渣揮干溶劑加入甲醇45mL密型);超聲波儀(昆山市超聲儀器有限公司KQ2200E閉放中國煤化上放冷,濾過(guò)濾液置于型);電子分析天平(日本島津AEU-210型);電熱50mCNMHG得供試品溶液收稿日期:2006-04-12作者簡(jiǎn)介:陳爽(1980—),女,河南鶴壁人,碩士研究方向:新藥研發(fā)與藥代動(dòng)力學(xué)通訊作者杜智敏Tel:(0451)86605353 E-mail:dzm1956@126,com中草嘴 Chinese Traditional and Herbal Drugs第38卷第2期2007年2月2.3.2對照品溶液的制備:精密稱(chēng)取120C干燥恒法測定吸光度,按回歸方程計算總黃酮的質(zhì)量分數重的蘆丁對照品10mg,加甲醇溶解并定容至50mL2.4抗炎效果的測定:采用二甲苯致小鼠耳部炎癥量瓶中,即得0.2mg/mL的對照品溶液試驗?。小鼠18~22g,雄性,100只,隨機分為102.3.3標準曲線(xiàn)的制備:分別取對照品溶液組,每組10只。其中9組為實(shí)驗組,分別ig給予提2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0mL于25mL量瓶取的醇浸膏,藥物溶液濃度為8%,劑量為中,加5%亞硝酸鈉1.0mL,靜置6min,加10%硝1.6g/kg,給藥容積為0.4mL/20g;另1組為對照酸鋁1.0mL,靜置6min后,加4%氫氧化鈉10.0組,給予等體積的蒸餾水。每天謳g給藥一次,連續mL,加甲醇至刻度,搖勻,靜置15min,進(jìn)行全波長(cháng)d。末次給藥后1h,每鼠右耳兩面均勻涂100%二甲掃描,在510m處均有最大吸收。以該波長(cháng)處吸光苯致炎劑0.02mL致炎,左耳作對照。1h后處死小值為橫坐標,樣品質(zhì)量濃度(mg/mL)為縱坐標,得鼠,沿耳廓基線(xiàn)剪下兩耳,用直徑9mm打孔器打下標準曲線(xiàn)回歸方程為C=1.9649A+0.0035雙耳同一部位圓片,電子分析天平稱(chēng)重,計算腫脹度0.9997,線(xiàn)性范圍為0.4~2.4mg/mL(腫脹度=右耳片質(zhì)量一左耳片質(zhì)量)。對9組實(shí)驗2.34精密度試驗:分別精密吸取的供試品溶液組與蒸餾水組腫脹度進(jìn)行t檢驗1.0mL,按實(shí)驗方法操作測定5次吸光度,結果2.5正交試驗結果與分析:試驗結果見(jiàn)表2。方差RSD分別為2.17%分析結果見(jiàn)表3?？梢?jiàn)各組乙醇提取物對二甲苯所2.35穩定性試驗:取供試品溶液室溫放置4、8、致小鼠耳部炎癥都有抑制作用,與蒸餾水組比較,第12、16、20、24h測定吸光度,RSD為1.29%,說(shuō)明供35、7組有顯著(zhù)性差別(P<0.05),其余各組有非常試品溶液在24h內基本保持不變。顯著(zhù)性差別(P<0.01)。由表2的R值看出各因素2.3.6回收率試驗:精密吸取供試品溶液0.5mL對浸膏收率、總黃酮的質(zhì)量分數、腫脹度的影響程度于25mL量瓶中,加入蘆丁對照品溶液順序均為醇體積分數>提取次數>提取時(shí)間>加醇(0.2mg/mL)0.5mL,制備供試品溶液,測定吸光量。方差分析表明:醇體積分數對浸膏收率、腫脹度度,計算得平均回收率分別為99.12%(RSD為有顯著(zhù)影響,而其余3因素對結果影響不顯著(zhù)。以抗1.66%)(n=5)。炎作用為主要指標,確定提取最佳條件為2.3.7樣品測定:精密吸取供試品溶液1.0mL,依A1B3CD2,即75%乙醇10倍量提取2次,每次4h表2提取工藝正交設計試驗結果Table 2 Results of extracting technology by orthogonal test實(shí)驗號浸膏收率/%總黃酮/%腫脹度(x±s)/mg12.242.5士1.210.107.592.9±1.0231231235.183.3±1.017.3210.252.3士1.53.2±1.2113.482.5±1.4蒸餾水組4.5±1.5浸膏收率37.3840.6843.0438.5039.2042.86R16.004.86總黃酮28.1626.0324.25K24.23中國煤化工腫脹度K8.17.6CNMHGK1.00.5與蒸餾水組比較:P<0萬(wàn)方數P