馬來(lái)酰亞胺基聚乙二醇單甲醚的合成研究

承德醫學(xué)院學(xué)指JOURNAL OF CHENGDE MEDICAL COLLEGEVol.30 No.1 2013護士培訓中的應用[].現代臨床護理,2010, 9(3):57-58.[5] 徐嵐,徐薇,韓穎,等.內鏡消毒質(zhì)量調查及其影響因素[3] 李小寒.淺談非語(yǔ)言護理溝通技巧J].實(shí)用護理雜志2000,分析[].中國感染控制雜志,2008, 7(2);117- -121.16(5):58- -59.[6]殷積美, 劉冰熔,劉巍.消化內鏡清洗消毒在監控管理中4]李筱軼,賈志英,馮忠軍,等.石家莊市12所醫院消持續改進(jìn)的探討[].中華醫院感染學(xué)雜志,2008, 18(8);化內鏡清洗消毒管理現狀調彭[0.中華醫院感染學(xué)雜114-1115.志,2009,19(5):536- -538.(收稿日期:2012- 09-07)(護理學(xué)欄目鰨輯:張健)技術(shù)方法馬來(lái)酰亞胺基聚乙二醇單甲醚的合成研究鄭霄,李云峰,王 良友,尹志峰(承德醫學(xué)院中藥研究所,河北承德067000)[關(guān)鍵詞]聚乙醇;馬來(lái)酰亞胺基聚乙二醇單甲醚;純化[中圖分類(lèi)號]R914.5[文獻標識碼]A[文章編號]1004- 6879(2013)01-0053-02隨著(zhù)生物技術(shù)的快速發(fā)展，越來(lái)越多的蛋白質(zhì)多肽類(lèi)mPEG-MAL5 0。通過(guò)對合成mPEG- -MAL后處理方法的藥物在疾病的預防和治療中得到應用。雖然蛋白質(zhì)多肽類(lèi)優(yōu)化選擇,得到了產(chǎn)率較高、純度較高的產(chǎn)物，具有較高的藥物的作用位點(diǎn)專(zhuān)一、療效確切,但溶解度低、穩定性差、應用價(jià)值。半衰期短、存在免疫原性等缺陷,限制了它們的給藥途徑1材料與方法和藥效的發(fā)揮。聚乙二醇(PEG)修飾可以很好地解決上述1.1 試劑單甲氧基聚乙二醇(PEGg00 -0H),美國Sigma問(wèn)題"。公司;二氯甲烷.三乙胺、對甲苯磺酰氯、乙醚、鄰苯二甲PEG是一種pH中性、無(wú)毒.水溶性較高的親水聚合酰亞胺鉀鹽、N,N-二甲基甲酰胺、無(wú)水乙醇、水合肼、二物，由環(huán)氧乙烯單體聚合而成。由于PEG反應官能團末端氧六環(huán)、馬來(lái)酸酐、乙酸酐、無(wú)水乙酸鈉均為分析純試劑。羥基的化學(xué)性質(zhì)不活潑而且選擇性不強,難以對蛋白質(zhì)1.2 儀器旋轉蒸發(fā)器RE- -52AA,上海亞榮生化儀器和多肽類(lèi)藥物進(jìn)行定點(diǎn)修飾,通常需要對其末端的官能廠(chǎng);WFH- -203三用紫外分析儀，上海精科實(shí)業(yè)有限公司;團進(jìn)行活化,然后將活化后的PEG衍生物通過(guò)化學(xué)方法高效液相色譜儀,美國Alltech公司;分析柱Accurasil Crg偶聯(lián)到藥物上。在對蛋白質(zhì)多肽類(lèi)藥物巰基定點(diǎn)修飾中，反 相硅膠柱(4.6X250mm),大連依利特分析儀器有限公使用較多的活化PEG是馬來(lái)酰亞胺基聚乙二醇單甲醚司。(mPEG- MAL)。為避免在修飾過(guò)程中發(fā)生交聯(lián)和團聚,通1.3 合成路線(xiàn)見(jiàn)附圖。常采用單甲氧基聚乙二醇(mPEG- -0H)作為修飾劑的合成原料2-。本研究首先在堿的催化下,用mPEG- -0H與對甲苯磺酰氯(Ts -C1)反應得到單甲氧基聚乙二醇對甲苯磺酸2-(酯(mPEG- -OTs),然后根據蓋布瑞爾合成法原理,以鄰苯二甲酰亞胺鉀鹽為親核試劑與mPEG--OTs反應，生成單甲氧基聚乙二醇的鄰苯二甲酰亞胺衍生物,再與水合肼反應肼解生成氨基化單甲氧基聚乙二醇(mPEG-NH),由馬中國煤化工域來(lái)酸酐與mPEG- NH2發(fā)生縮合,再經(jīng)脫水得到最終產(chǎn)物1.3 合成方HCNMH G●53.承德醫學(xué)院學(xué)撲JOURNAL OF CHENGDE MEDICAL COLLEGEVol.30 No.1 20131.3.1 mPDG -OTs的制備:稱(chēng)取mPEGs0 -0H 5g(1mmo)1:1.3:1反應，用RP-HPLC監測反應進(jìn)程，觀(guān)察mPEG-置于茄形瓶中,加入20ml二氯甲烷溶解,再加入0.86ml三MAL峰、多肽峰與新物質(zhì)峰的生成變化,其保留時(shí)間符合乙胺(6mmol)和1.14g的對甲苯磺酰氯(6mmo),室溫下攪理論值,證實(shí)其活性。拌反應24h。反應過(guò)程中用TLC(甲醇:二氯甲烷=1:6)檢測3討論反應進(jìn)程,待原料點(diǎn)消失,表明反應完全,依次用0.1%檸檬在mPEG--MAL的合成中,經(jīng)過(guò)兩種不同的后處理酸鈉溶液、飽和氯化鈉溶液洗三遍,無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓純化方法。除上述方法外,有文獻報道將反應結束后的反旋蒸除去溶劑,加無(wú)水乙醚沉淀出固體,抽濾,產(chǎn)物為白色應液過(guò)濾除去不溶物，80C減壓旋蒸除去溶劑，殘余物加固體,放入干燥器中于燥。得到產(chǎn)品4.85g,產(chǎn)率97%。入二氯甲烷溶解,再加入適量活性炭,放置30min.濾除活1.3.2 mPDG -NH2的合成:將4.5g mPFGx0 -0Ts0.9mmol)性炭,減壓旋蒸溶劑，加入無(wú)水乙醚沉淀，千燥得到終產(chǎn)溶于15ml N,N-二甲基甲酰胺中,加入1g鄰苯二甲酰亞胺物mPEG--MAL6.經(jīng)過(guò)多次重復和比較試驗后，在RP-鉀鹽(5.4mmo), 120C下氮氣保護反應4h.90C減壓旋蒸除HPLC檢測下,采用此方法在較少劑量時(shí),可以得到和前去溶劑,將殘余物溶于35ml無(wú)水乙醇,加入3.5ml水合肼,述方法產(chǎn)物純度相當的產(chǎn)物，但在加大劑量時(shí),用此法則90C加熱回流反應4h.60C減壓旋蒸除去溶劑,產(chǎn)物溶于二無(wú)法得到所要產(chǎn)物。分析可能是大劑量反應時(shí),要長(cháng)時(shí)間氧甲烷,濾去不溶物，依次用純水、飽和氯化鈉溶液洗三遍，高溫旋蒸除去溶劑，使mPEG- -MAL中的五元環(huán)斷裂,產(chǎn)無(wú)水硫酸鈉干燥。TLC點(diǎn)板。減壓蒸去溶劑,加無(wú)水乙醚沉生了其它副反應,破壞了原有產(chǎn)物。淀出固體,抽濾,產(chǎn)物為白色粉末狀固體,放入干燥器中千本研究比較了幾種后處理純化方法,進(jìn)行了多步的燥。得到產(chǎn)品4.2g,產(chǎn)率93%。純化操作,簡(jiǎn)化了操作步驟,優(yōu)化了純化方法,減少了產(chǎn)1.3.2 mPDG- -MAL的合成:將3g mPDG00 NH2(0.6mmol)物損失,得到的產(chǎn)物純度較高，由mPEG--NH2得到產(chǎn)溶于30ml二氧六環(huán)中,在80“磁子攪拌的條件下與0.24g物mPEG- -MAL的產(chǎn)事達到76%,高于其它文獻記載的馬來(lái)酸酐(2.4mmol)反應30min。待反應結束,于55C下旋48%6。本研究可為實(shí)驗室或其它單位合成mPEG-MAL蒸除去二氧六環(huán),乙醚沉降,干燥。將所得固體溶于30ml提供借鑒經(jīng)驗。乙酸酐,加入1g無(wú)水乙酸鈉, 100C下攪拌反應45min。濾[參考文獻]除反應液中的固體,向反應液中加入10倍乙酸酐體積的[1]路娟， 劉清飛，羅國安，等.藥物的聚乙二醇修飾研究進(jìn)展[J].有機化學(xué),2009,29(4):1167-1174.純水，然后用二氯甲烷萃取水層三次,二氯甲烷層經(jīng)飽和[2] Zalipsky S.Chemistry of polyethylene glycol conjugates with氯化鈉溶液洗三次后,無(wú)水硫酸鈉干燥.TLC檢測。減壓biologically active molecules []Advanced Drug Delivery蒸去溶劑，乙醚沉降,抽濾,得到淡褐色固體2.3g,產(chǎn)率Reviews,199,16(2-3);157-182.76%。[3] KoganTP. The sythesis of subsited mtbosploytylaneglyco)2結果derivatives suitable for selective protein mifiatin[]. Synthetic反應過(guò)程中通過(guò)TLC檢測判斷產(chǎn)物的有無(wú)及反應程Communications, 1992, 2(6)2417-2424.度。mPEG- -OH點(diǎn)為碘顯色,mPEG- -OTs 點(diǎn)碘顯色.254nm[4] 王良友, 劉克良.多肽和蛋白質(zhì)的聚乙二醇化修飾方法[].有機化學(xué), 2003, 1(23): 1320-1323.紫外下顯色,mPBG- -NH2 茚三酮顯色,mPBG- -MAL點(diǎn)紫外[5] 王孝杰, 孫建平,李效東，等.氨基化單甲氧基聚乙二醇顯色。最終產(chǎn)物進(jìn)行RP -HPLC分析,檢測波長(cháng)為215nm,梯的合成研究[].精細化工中間體,2006,36(1):40- -42.度洗脫A:0.0S% TFA/H20.B:0.0S% TFA/70% CHzCN[6] 蔣志龍. 基于胸腺素a 1活性片段的環(huán)肽類(lèi)似物的設計/H20,流速為1m/min.mEGoo-MAL保留附間29.273min。合成與活性評價(jià)[D].北京:中國人民解放軍軍事醫學(xué)科學(xué)院,2004.將mPEG--MAL與聯(lián)接半胱氨酸的多肽分別以當量1:3、(收稿日期:2012- -08- -25)(技術(shù)方法欄目編輯:張健)中國煤化工MHCNMH G●54.