乙醇脫氫酶對小鼠抗醉解酒作用的研究

陜西科技大學(xué)學(xué)報Aug.2009JOURNAL OF SHAANXI UNIVERSITY OF SCIENCE & TECHNOLOGY文章編號:1000-5811(2009)04006303乙醇脫氫酶對小鼠抗醉解酒作用的研究毛跟年,李麗維,齊鳳,張曉霞(陜西科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,陜西西安710021)摘要:通過(guò)抗醉和解酒兩項實(shí)驗,觀(guān)察了乙醇脫氨酶直接作為解酒藥物的抗醉酒及解酒作用.結果顯示,乙醇脫氬酶在防酒醉試驗中的作用效果比較明顯,尤其是在給酒后1h,小鼠血液中乙酵含量降低最明昰,而對巳經(jīng)處于酒醉狀態(tài)的小鼠的解酒作用效果并不明顯.關(guān)鍵詞:乙醇脫氫酶;抗醉酒;解酒中圖分類(lèi)號:Q554+,9文獻標識碼:A0引言乙醇脫氫酶( alcohol dehydrogenases,簡(jiǎn)稱(chēng)ADH)是廣泛專(zhuān)一性的含鋅金屬酶,以NADH為輔酶,催化伯醇和醛之間的可逆反應.乙醇脫氫酶在人體內主要分布于胃壁和肝臟細胞中,在乙醇代謝中發(fā)揮著(zhù)重要作用.近年來(lái)國內外的研究表明,飲酒后有部分乙醇既未進(jìn)入血液循環(huán),也未潴留在消化道內,而是在胃內被氧化代謝這一現象被稱(chēng)為乙醇的第一關(guān)卡代謝( First-pass metabolism of ethano).胃乙醇脫氡酶是參與這一代謝的主要酶.胃內這一代謝可調節乙醇的生物利用度,進(jìn)而影響乙醇對肝臟及機體的毒性作用如果在胃內可以加強乙醇的分解,就可以防止其進(jìn)入胃壁細胞以及肝臟細胞中,從而達到保護胃粘膜和肝臟的功效,同時(shí)也可以防止乙醇及乙醛進(jìn)入血液循環(huán),損壞人體的神經(jīng)系統,造成其他的毒副作用1材料與方法1.1實(shí)驗材料(1)ADH酶液:自制;胃蛋白酶、胰蛋白酶和輔酶: sigma公司;56°北京紅星二鍋頭:北京紅星股份有限公司;其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純(2)昆明種小鼠體重(20士2)g,雌雄各半西安交通大學(xué)醫學(xué)院實(shí)驗動(dòng)物中心提供,小鼠按常規方式飼養一周,挑選健康正常者,隨機分組.實(shí)驗前禁食12h,自由飲水(3)紫外可見(jiàn)分光光度計(北京瑞利分析儀器廠(chǎng));臺式超速離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng));微量移液槍( Gilson, france);超級恒溫器(重慶試驗設備廠(chǎng));冰箱等.1.2實(shí)驗方法1.2.1酸性重鉻酸鹽氧化法用涂有肝素的離心管接取新鮮小鼠的血6份,每份取500山L,用微量進(jìn)樣器按0、0.5、1、1.5、2、2.5、3pL系列添加50%的乙醇分別加入500L120%三氯乙酸沉淀蛋白,以8000r/min冷凍離心沉淀6min,取上清液各600HL,加重鉻酸鉀硫酸試劑1.8mL,100℃水浴加熱10min,取出冷卻至室溫.用空白水做參比液,測其在595nm處的吸光度值1.2.2血液中乙醇濃度的檢測中國煤化工收稿日期:2009-05-04CNMHG作者簡(jiǎn)介:毛跟年(1962-),男陜西省涇陽(yáng)縣人,教授,研究方向:生物藥物材料研究與應用基金項目:陜西省自然科學(xué)基金項目(SJo8B18)、陜西省教育廳專(zhuān)項科研計劃項目(編號08JK236)陜西科技大學(xué)學(xué)報第27卷用移液槍準確吸取500L血樣于預先涂有抗凝肝素的具塞試管中,加入500山L120%三氯乙酸以沉淀樣品中的蛋白質(zhì),以8000r/min冷凍離心沉淀6min,取上清液各600L,加重鉻酸鉀硫酸試劑1.8mL,100℃水浴加熱10min,取出冷卻至室溫.用空白水做參比液測定其在595nm波長(cháng)處的吸光度值.根據標準曲線(xiàn)回歸方程計算小鼠血液中乙醇的含量1.2.3數據分析實(shí)驗數據用X士S表示,采用配對t檢驗進(jìn)行統計學(xué)分析2結果與討論00.5152乙醇含量/HL2.1標準曲線(xiàn)的繪制2圖1體內檢測低濃度乙醇以小鼠血液中乙醇含量為橫坐標,595nm處的吸光度為縱坐標含量標準曲線(xiàn)作圖繪制標準曲線(xiàn),如圖1所示回歸方程為:y=0.0377x+0.1021,R2=0,9965.標準曲線(xiàn)的回歸方程用于對小鼠體內的乙醇含量進(jìn)行定量分析表1動(dòng)物醉酒乙醇用量的確定22小鼠酒醉乙醇用量測定結果1醉倒時(shí)間/min在動(dòng)物實(shí)驗中,首先需要確定小鼠酒醉的乙醇用量,灌胃給組別酒的劑量太大容易引起小鼠中毒而死亡,劑量太小又不足以引1組(0.015mL/g)-10起小鼠醉倒,故需要選用合適的劑量進(jìn)行實(shí)驗實(shí)驗對4組(每2組(0.016mL/g)54651514組6只)不同給酒劑量的小鼠進(jìn)行了考察,以1h內翻正反射消3組(0.017mL/g)21失的時(shí)間為指標,確定能夠引起小鼠酒醉的乙醇用量4組(0.018mL/g)由表1可以看出,給酒劑量0.015mL/g不足以使小鼠醉注:“*”死亡;“一”未醉倒倒,有3只小鼠沒(méi)有出現翻正反射消失,其醉倒率為50%;0.018mL/g的劑量過(guò)大,有4只小鼠死亡;0.017mL/g的劑量下有2只小鼠死亡.故實(shí)驗確定0.016mL/g的劑量為小鼠酒醉的乙醇用量,在此劑量下小鼠醉倒率為100%,且沒(méi)有發(fā)生小鼠死亡2.3乙醇脫氫酶抗酒醉及解酒實(shí)驗3將小白鼠隨機分成3大組,每大組均包括實(shí)驗組和空白對照組,每小組各8~10只小鼠表2乙醇脫氫酶防酒醉實(shí)驗乙醇含量測定結果2.3.1乙醇脫氫酶抗酒醉實(shí)驗觀(guān)察時(shí)間對照組實(shí)驗組乙醇含量降低各組小鼠均采用灌胃的方法一次性給/h/uL/mL)L/m1)百分率/%藥,小鼠的用藥劑量即為小鼠醉酒的乙醇0.56.0336±0.10615.7329±士0.29545.0用量(0.016mL/g).給予實(shí)驗組小鼠乙醇3.9823±0.13593.6287±0.0556脫氫酶與NAD液等比例混合液,空白對1.54.4951±0.15134.3178±0.08873.9照組小鼠同體積的生理鹽水.給藥10注:與對照組相比P<0.05,P<0.01后,給予各組動(dòng)物相同劑量的白酒(56紅表3乙醇脫氫酶解酒實(shí)驗乙醇含量測定結果星二鍋頭),分別觀(guān)察0.5h、1.0h、1.5h察時(shí)間對照組試驗組乙醇含量降低后,各組小鼠均斷頭取血采用酸性重鉻酸h/uL/mL)(/m).百分率/%鹽氧化法測定小鼠血液乙醇濃度實(shí)驗結0.54.3979±0.12554.3360士0.091414.2211±0.25484.1680±0.1765果如表2所示1.54.2564士0.06424.2122±0.1860從表3可以看出,在乙醇脫氫酶防酒醉實(shí)驗中,先給藥再給酒,并在隨后的0.5h、1h、1.5h內對實(shí)驗小鼠血液中的乙醇含量進(jìn)行檢測的結內的乙醇含量均高于實(shí)驗組給藥)小鼠給酒0.5h后,實(shí)驗中國煤化立理鹽水)小鼠體差異顯著(zhù)(P<0.05),乙醇含量降低了5%;給酒1h后,實(shí)HCNMHG空白對照組相比差異極為顯著(zhù)(P<0.01),乙醇含量降低了8.9%;給酒1.5h后,實(shí)驗組小鼠血液中的乙醇含量較空白對第4期毛跟年等:乙醇脫氫酶對小鼠抗醉解灑作用的研究·65·照組相比差異顯著(zhù)(P<0.05),乙醇含量降低了3.9%.由此可以推測,可能在小鼠胃部時(shí)乙醇脫氫酶在輔酶的作用下參與了乙醇分解代謝的過(guò)程,乙醇很快降解,從而有效的阻止了乙醇進(jìn)入血液循環(huán)這種作用在給酒后1h內表現得最為明顯.給藥1.5h給酒,效果不明顯,有可能是乙醇脫氫酶長(cháng)時(shí)間在胃部的酸性環(huán)境下活性降低或失去活性,致使無(wú)法將乙醇降解,較多的乙醇被吸收2.3.2乙醇脫氫酶解酒實(shí)驗按照0.016mL/g的劑量,先給各組小鼠白酒(56°紅星二鍋頭),10min后再給各實(shí)驗組小鼠相同劑量的藥液(乙醇脫氫酶液與NAD液等比例混合液),對照組小鼠給予相同體積的生理鹽水,分別于0.5h、1h、1.5h后,各組小鼠斷頭取血,采用酸性重鉻酸鹽氧化法檢測血液中乙醇含量實(shí)驗結果如表3所示由表3可以看出在各檢測時(shí)間段內,未給藥的對照組小鼠血液中乙醇含量的平均值均高于給藥的實(shí)驗組小鼠,但實(shí)驗結果經(jīng)過(guò)t檢驗發(fā)現差異性不顯著(zhù),表明乙醇脫氫酶在小鼠解酒實(shí)驗中的作用效果并不顯著(zhù).可能是在飲酒后,經(jīng)食道、胃、腸道等器官乙醇已被體內吸收,再給藥時(shí),乙醇脫氫酶只能降解胃內部分的乙醇,而且隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng),乙醇脫氫酶酶活降低或活性喪失因此在1.5h時(shí)乙醇含量的降低率很低3結論乙醇脫氫酶在乙醇代謝中發(fā)揮著(zhù)至關(guān)重要的作用,它可催化乙醇生成乙醛,乙醛再在乙醛脫氫酶的作用下生成乙酸,經(jīng)TCA循環(huán)最終生成CO2和HO.本實(shí)驗通過(guò)乙醇脫氫酶的防酒醉實(shí)驗和解酒實(shí)驗考察了其在體內分解乙醇的情況,并通過(guò)t檢驗進(jìn)行了實(shí)驗數據的統計學(xué)分析.結果表明,ADH在抗酒醉實(shí)驗中的作用效果比較明顯,尤其是在給酒后1h,血液中乙醇含量降低最明顯,與未給藥的對照組小鼠血液中的乙醇含量相比,乙醇含量降低了8.9%,效果極為顯著(zhù).但在解酒實(shí)驗中,乙醇含量降低都很小,實(shí)驗所得數據沒(méi)有統計學(xué)意義,表明乙醇脫氫酶對已經(jīng)處于酒醉狀態(tài)的小鼠的解酒作用效果并不明顯推測原因可能是由于先給藥再給酒,乙醇脫氫酶可很快將乙醇降解,從而有效的阻止了乙醇的吸收.而在解酒方面,由于乙醇在體內極易吸收飲酒后再給藥,致使很多乙醇在未被降解前已被體內吸收,因而解酒效果不明顯.參考文獻[1] Watanabe M. 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