黃芩苷提取工藝研究

007年8月第4卷第23期藥物研究黃芩苷提取工藝研究翟保同’,王瑩(1河南省南陽(yáng)市中心醫院河南南陽(yáng)473004;2河南省南陽(yáng)理工學(xué)院河南南陽(yáng)473004)[摘要]目的:對現有黃芩苷提取工藝中的水提酸沉、水洗醇洗各參數進(jìn)行優(yōu)化,為今后黃芩苷的提取和純化提供參考。方法:以黃芩苷含量為指標通過(guò)正交設計實(shí)驗對影響水提酸沉水洗醇洗工藝的因素進(jìn)行考察并進(jìn)行方差分析。結果:確定了提取黃芩苷的最佳工藝條件。結論:該提取工藝合理,黃芩苷收率高質(zhì)量易于控制。[關(guān)鍵詞]黃芩菩;飲片;粗粉;冰乙酸;乙醇;紫外分光光度法;方差分析[中圖分類(lèi)號]R2842[文獻標識碼]A[文章編號1673-7210(2007)08(b)-091-03Study on the extraction technology of baicalinZHAI Bao-tong, WANG Ying(. Nan Yang Central Hospital, Nanyang 473004, China; 2. Nanyang Institute of Technology, Nanyang 473004, China)[Abstract] Objective: To define the optimal parameters of extracting with water, depositing with acid, washing with waterthanol in the extracting of baicalin from scutellaria. And to supply a reference for the extraction and purification oficalin in future. Methods: Using the content of baicalin as an assessing index, the optimum extracting conditions whichwere about extracting with water, depositing with acid, washing with water and ethanol were selected by orthogonal designand the analysis of variance. Results: The optimum extracting conditions of baicalin were selected. Conclusion: The ex-traction technology is reasonable the yield of baicalin is high, and the quality is easily controlled[Key words] Baicalin; Decoctionpieces: Coarse powder, Glacial acetic acid; Ethanol; Ultraviolet spectrophotometry; analy黃芩中含多種黃酮類(lèi)化合物,主要為黃芩苷( baicalin)稱(chēng)取黃芩飲片200g,平均分成4份,每份50g;稱(chēng)取黃黃芩苷元(baln)漢黃芩苷( wogonoside).漢黃芩素(wogo苓粗粉200g,平均分成4份,每份50g分別按表1黃芩水nin)、黃芩新素( skulleapflavone)和Ⅱ等,具有抗菌、抗病提取工藝因素水平和表2黃芩水提取工藝正交設計進(jìn)行試毒、抗變態(tài)反應、抗炎、抗氧化,增強機體免疫力,鎮靜與降驗,每份提取液用蒸餾水定容至1000ml容量瓶中,待測含壓,利膽與解痙等作用7黃芩的主要化學(xué)成分黃芩苷在植物體內以鎂鹽形式存在,所以可用水作提取溶劑。黃芩苷分子結構中C2上羧基常表1黃芩水提取工藝因素水平表成鹽形式存在加酸后黃芩苷分子就游離出來(lái)。利用黃芩苷因素藥材煮次第1次煎第2、3次煎加水倍在酸性溶液中易析出的性質(zhì)采用水提取、酸沉淀再用水洗、水平粒度數(次)煮時(shí)間(h)煮時(shí)間(h)數(倍醇洗的方法進(jìn)行提取和純化。1儀器與材料1飲片20201.1儀器紫外分光光度計UV-265(日本島津)。準確量取每份實(shí)驗提取液2ml,置燒杯中,加稀鹽酸調12材料pHl-2,移人10ml離心管中,每次用水025ml洗滌容器洗黃(中國藥品生物制品檢定所)黃(購自南陽(yáng)市滌液并人離心管中,至沉淀全部移人為止。離心,棄去上清藥材公司);甲醇為色譜純;冰醋酸為分析純。2方法與結果液,每次用丙酮05m洗滌沉淀,離心,棄去丙酮,至丙酮液近無(wú)色為止。用95%乙醇將沉淀移至100m容量瓶中加熱2.1黃芩水提取工藝的研究利用正交設計,以黃芩苷含量為指標選擇藥材粒度提使溶解放冷至室溫加乙醇稀釋至刻度搖勻。然后精密吸取次數、第1次煎煮時(shí)間第23次煎煮時(shí)間、加水倍數五個(gè)取5m,置50m1容量瓶中,加乙醇稀釋至刻度,播勻。依照因素每個(gè)因素各選二個(gè)水平采用L(2)正交表進(jìn)行設計試分光光度法在279mm波長(cháng)處測定吸收度按CHO1的吸驗(表1)收系數E)673計算黃芩苷的含量結果見(jiàn)表2。中國煤化工CNMHGCHINA MEDICAL HERALD國醫藥91藥物研究·2007年8月第4卷第23期表2黃芩水提取正交試驗結果35黃芩苷含量表頭設計E23.96512345678巧122221122121123.29522122121479015.775146051545515.98018.01017.16016.220163103.9953.9984.03000540.6390.1690.1190214用正交試驗的直觀(guān)分析法進(jìn)行分析,從R值的大小可表3黃芩水提取試驗方差分析知:各因素的主次順序為BCE>D>A。較優(yōu)組合為:方差來(lái)源A,BCDE2,即用粗粉、煎煮3次每次煎煮2h每次加12倍1465×103465×103<177121.20量水。C10815908159363對上述資料進(jìn)行方差分析,見(jiàn)表3。從方差分析知B、Cp0028100281125達到了極顯著(zhù)水平,雖然E沒(méi)有達到顯著(zhù)水平,但其F值也E0091280091284614較大,應控制在最優(yōu)水平,而D和A因素可以在任意水平,誤差e200571002855127為了節約工時(shí),同時(shí)考慮到實(shí)際生產(chǎn)中顆粒粉易焦化、粘結,誤差e400900m475過(guò)濾難的特點(diǎn)。A應取A1,D應取D1。因Ⅱ>l2,Ⅱ心少,Ⅱ?？傋儺?所以,B取B2,C取C2E取E2。最佳提取工藝是A1B2C2D申P(guān)001E,即用黃芩飲片煎煮3次,第1次2h,第23次各1h,每表4黃芩酸沉工藝因素水平次加12倍量水因素相對密度pH值保溫溫度(℃保溫時(shí)間(h)靜置時(shí)間(h)2黃芩酸沉工藝的研究水平ABC用正交試驗以黃芩總苷含量(即沉淀量)為指標選擇濃1105-101-280縮液相對密度加酸后的pH值、保溫溫度、保溫時(shí)間、靜置211512034時(shí)間5個(gè)因素,每個(gè)因素各選2個(gè)水平,采用L42)正交表進(jìn)行設計試驗(表4)。份按表4酸沉工藝因素水平和表5酸沉工藝正交試驗設計稱(chēng)取黃芩飲片800g,第1次煎煮2h第23次各煎煮及黃芩總苷含量進(jìn)行試驗以黃芩總苷含量(即沉淀量)為指1h,每次加12倍量水合并煎液濾過(guò)將濾液平均分成8標(表5)表5黃芩工藝正交試驗設計及黃芩總苷含量7黃芩苷含量表頭設計5121221215.0854.798K,20.21719261829118.38416.520174721844618.13918.35318.3294.5964024.6124.535中國煤化工a20039YHaCN MHG2292山國醫藥導 CHINA MEDICAL HERALD2007年8月第4卷第23期藥物研究·用正交試驗的直觀(guān)分析法進(jìn)行分析,從R值的大小可裹7黃芩苷的收率及成品率知:因素的主次順序為 A>BDE。最優(yōu)組合為 A,BCD,E1。對實(shí)驗序號粗昔重量(B)粗苷中苷含量()精苷重量(B)上述資料進(jìn)行方差分析見(jiàn)表6。48.6569468663786521表6黃芩酸沉試驗方夔分析799496方差來(lái)源A1,708471.708471067810134.12結果表明:1000g黃苓藥材中提取精制后精黃芩苷含002633500263351646量為46.8~521g0084666008466652923討論E178x1078×104<1本實(shí)驗采用正交設計考察了水提取、酸沉淀、水洗、醇洗誤差e2402×103201x10-3誤差e348×10316103工藝并進(jìn)行了方差分析,確定了提取黃芩苷的最佳工藝參總變異2.226133數PQ005:PQ001實(shí)驗證明該提取工藝合理,黃芩苷收率高,質(zhì)量易于控制,可以為工業(yè)化生產(chǎn)所采用方差分析可見(jiàn)A、B、C、D均達到顯著(zhù)水平,僅E沒(méi)達到,[參考文獻][1江蘇新醫學(xué)院中藥大辭典M下冊上海:上海人民出版社19772019可以控制在任意水平即最佳組合為 A, DE1o即濃縮至(2]鄭虎占薰澤宏余靜,中藥現代研究與應用(M第4卷北京學(xué)苑出相對密度1.05-11080℃測),加稀鹽酸調節pH-2,80℃保溫版社,19981h靜置24h[3]楊克文,張軍.黃芩根中抗流感A(H3N2)和B病毒的黃酮類(lèi)成分23水洗、醇洗工藝的研究574-三羥基8-甲氧基黃酮門(mén)國外醫學(xué)中醫中藥分冊,199183黃芩苷在酸性條件下可析出酸沉后的沉淀物用水洗至4 X, Akatsu H, Dkada. Apoptosis of HIv- infected cells following treatpH50,水洗的目的是洗出酸處理過(guò)程中產(chǎn)生的無(wú)機鹽及nt with sho-gociko-to and its components U]pn J Med Sci Bic些水溶性雜質(zhì)繼用70%乙醇洗至pH70醇洗可以洗去199548(2:7981部分醇溶性的雜質(zhì)。雖然黃芩苷是黃芩的主要有效成分,但[5] Li BQ, Fu T, Yan YD, et a. Inhibition of HIV-infection by baicalin aflavonoid compound purified from Chinese herbal medicine []. Cell Mol黃芩苷元的作用不可忽視,黃芩苷元的溶解度隨著(zhù)乙醇濃度Biol Reg,1993,39(2:119-123增高逐漸增大,在95%乙醇中的溶解度最大,所以為了減少] Huang HC, Hsieh Ly, Chen HW,etd. Effects of baicalein and esculetin黃芩苷元的損失,用70%乙醇進(jìn)行醇洗比較合適。on trans-duction signals and growth factors expresion in T-lymphoid24黃芩出膏率及半成品中黃芩苷的含量leukemia cells[ Eur J Pharmacol, 1994, 268(1 ): 73-75取黃芩飲片100g5份,按照以上黃芩苷優(yōu)選的條件,7賀海平秦菁陳明等.一種新的黃芩類(lèi)黃酮3567-四羥基-28-二甲氧基黃酮的體外免疫作用門(mén)廣西醫科大學(xué)學(xué)報2000173353-35進(jìn)行水提取、酸沉、水洗、醇洗,低溫干燥。稱(chēng)量每份粗黃芩苷(收稿日期:2007-04-25)的得率結果見(jiàn)表7。血國該恥刊鬱選,掘厙咖國刊全文數掘庫啦親刊《血國醫藥導報)志歡迎投稿地址:北京市朝陽(yáng)區通惠家園惠潤園(壹線(xiàn)國際153-601《中國醫藥導報雜志社郵政編碼:10025電話(huà)010-59679765967907:801傳真.00E3y299163cm中國煤化工CNMHCHINA MEDICAL HERALD醫藥導提93