萎胃湯對大鼠血清SOD活性、MDA、GAS的影響研究

江西中醫學(xué)院學(xué)報2013年6月第25卷第3期JOURNAL OF JIANCXI UNIVERSITY OF TCM2013 Vol25 No.3胃湯對大鼠血清SOD活性.MDA、GAS的影響研究★張倫'劉蔚'戈焰'榮尚一2 (1.廣東省第二二中醫院廣州510095; 2.南方醫科大學(xué)公共衛生與熱帶醫學(xué)學(xué)院廣州510515)摘要:目的:通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗研究探討萎胃湯的作用機制。方法:取SPF級SD大鼠70只,經(jīng)病理組織學(xué)檢查判定慢性蔞縮性胃炎(CAC)動(dòng)物模型復制成功后,將模型動(dòng)物按體重隨機均分為模型組、胃復春組(0.54g1kg)、萎胃湯高(20.8g生藥Akg)、中(10.4g生藥kxg)、低(5.2 g生藥kg)劑量組(分別為4倍2倍、1倍臨床等效劑量)。按照測試盒的要求測定胃酸、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、、血清丙二醛(MDA)、血清胃泌素(GAS)含量。結果;治療12周后,各給藥組大鼠胃液PH、血清血清SOD活性、MDA、GAS含量等方面均較模型組顯著(zhù)改善(P<0.01),其中蔞胃湯高、中劑量組較胃復春組改善程度具有顯著(zhù)性差異(P<0.01 或P<0.05)。結論:萎胃湯能改善CAG模型大鼠的生存質(zhì)量、降低胃液PH值(P<0.01),升高血清GAS含量(P<0.01)、升高SOD活性(P<0.01)、降低MDA含量(P<0.01),且蔞胃湯高、中劑量組較對照藥胃復春為好。態(tài)關(guān)鍵詞:萎胃湯;模型大鼠;超氧化物歧化酶活性;丙二醛;胃泌素中圖分類(lèi)號: R285.5文獻標識碼: A研究The Study of Weiwei Decoction Effects on Rat Serum SOD Activity、MDA GAS約230 mL,稱(chēng)重,量取1/50的濃縮液,按照正交實(shí)驗循環(huán)提取4小時(shí),并濃縮成膏,80心干燥,粉碎,過(guò)中干膏率的測定方法測定干膏率,考察優(yōu)化提取工篩,加人沉香粉和適量糊精,制粒,壓片，即得。藝在熱循環(huán)回流循環(huán)提取濃縮機組的重現性,結果3討論見(jiàn)表5。3.1通過(guò)對處方 進(jìn)行實(shí)驗室階段研究,優(yōu)選最佳提表5健胃消脹片提取工藝的重現性取工藝為藥材加18倍量的水,浸泡30 min,循環(huán)提批號干膏率(%)取4小時(shí),該提取工藝在熱循環(huán)回流循環(huán)提取濃縮200808139.17機組中應用中重現性較好,質(zhì)量易于控制。200810069.223.2健胃消脹片根據通降胃氣之法創(chuàng )立,選用枳200812059.19殼大腹皮沉香三者共用為君藥,共湊行氣消脹之MEAN力,彰顯胃氣下降之作用,對上腹部脹滿(mǎn)、胃脘疼RSD0.27痛,屬于脾胃氣滯證的療效顯著(zhù),值得臨床推廣使結論:按優(yōu)化提取工藝采用熱循環(huán)回流循環(huán)提用,造福于廣大脾胃病的患者。取濃縮機組提取健胃消脹片三批,測定提取液的干[1]吳謀,陳繼英健胃消脹片部分成分的鑒別和含量測定[J].中國參考文獻膏率,結果表明健胃消脹片提取工藝在熱循環(huán)回流醫院藥學(xué)雜志,2011,31(20);1 742-1 743.循環(huán)提取濃縮機組中有較好重現性。[2] 董明國,盧曉敏.周正.等.健胃消脹片對胃腸系統藥理作用研究2.4.2制備工藝確定[0]. 中西醫結1中國煤化工、處方中十味,沉香粉碎,過(guò)篩,備用;其余枳實(shí)YHC N M H G期:2013-01-23)等九味加水18倍量的水,浸泡30 min,熱循環(huán)回流68..張倫等:萎胃湯對大鼠血清SOD活性MDA、GAS的影響研究ZHANG Lun', LIU Wei', GE Yan' , Rong Shang- yi?1. Guangdong Second Provincial Traditional Chinese Medice Hospital, Guangzhou 510095;2. Southern Medical University School of Public Health and Tropical Medicine , Guangzhou 510515Abstract: Objective: Through the animal experiment to study the mechanism of action of Weiwei decoction. Methods: SPF of 70 SDrats were examined by histopathology , determine the replication of successful animal model of chronic atrophic gastritis(CAG), the ani-mal models were randomly divided into model group, w eifuchun group (0.54g/kg) , Weiwei decoction high (20.8 g crude drug /kg),medium (10.4 g crude drug /kg) , low (5.2 g crude drug /kg) dose group (respectively 4 times, 2 times, 1 times as clinical equivalentdose. ). According to the requirements of Laboratory reagents do gastric acidity determination.serum superoxide dismutase (SOD) activi-ty, malondialdehyde (MDA) , serum gastrin (GAS) content.Results: after 12 weeks treatment, the rats administered PH of gastricjuice, serum SOD activity, serum MDA, GAS were signifcantly improved compared with model group (P<0.01) , Weiwei decoctionhigh. middle dose group were significantly improved compared with Weifuchun group (P<0.01 or P<0.05 ). Conclusion: Weiwei decoc-tion can improve the CAG rat model of quality of life, reduce the PH value of gastric juice (P<0.01), the content of serum CAS (P<0.01), increase the activity of SOD (P<0.01), decreased the content of MDA (P<0.01) , and the high, middle dose Weiwei decoctiongroup better than in the control drug W eifuchun.Keywords: Weiwei Decoction; Rat Model; Superoxide Dismutase; Malondialdehyde; Gastrin慢性萎縮性胃炎屬于中醫學(xué)“胃脘痛”、“胃痞”水瓶中,外貼黑色避光紙,整個(gè)配制過(guò)程全部避光實(shí)等范疇"。中醫學(xué)認為本病病因不外乎飲食不節、操作。驗情志所傷與脾胃虛弱。慢性萎縮性胃炎患者久病1.2.2劑量設置以藥品說(shuō)明書(shū)標示臨床日用量作研究脾虛,加之調養失當，外邪侵襲等因素,使中氣更虛為基礎,參考《中藥藥理研究方法學(xué)》中的劑量換算不足以行血,漸致壅滯成瘀。脾虛血瘀證是慢性萎方法“體表面積比”換算動(dòng)物試驗劑量作為臨床等縮性胃炎中醫學(xué)臨床最常見(jiàn)證型,萎胃湯驗之臨床效劑量。換算后,胃復春片為0.54g Akg(2倍臨床等屢獲良效,本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗研究萎胃湯可能的效劑量) ,萎胃湯高劑量為20.8 g生藥/kg、中劑量為作用機制,為今后更深-步的研究工作打下基礎,10.4 g生藥/kg、低劑量為5.2 g生藥kg(分別為4倍現將動(dòng)物實(shí)驗研究報告如下。臨床等效劑量、2倍臨床等效劑量臨床等效劑量)。1材料與方法1.2.3動(dòng)物造模取SPF級SD大鼠70只,雌雄各半,1.1材料常規喂養1周后,隨機抽取雌雄各5只作為空白對1.1.1 實(shí)驗動(dòng)物SPF級SD大鼠,雌雄各半,體重照組,其余大鼠采用1500μg/mL的MNNG飲水加180-220g,由廣東省醫學(xué)實(shí)驗動(dòng)物中心提供,實(shí)驗饑飽失常的方法復制CAG模型-),連續3個(gè)月。具動(dòng)物生產(chǎn)許可證號:SCXK(粵)2003- 0002。動(dòng)物飼體操作如下。養環(huán)境:廣東省中醫研究所SPF級實(shí)驗室,實(shí)驗動(dòng)物(1)MNNG溶液自由飲用:濃度為1500μg/mL使用許可證號:SCXK(粵)2005-_0059,溫度20C-的MNNG溶液,裝人外涂黑色的飲水瓶中,每天更25C,濕度60%-70% ,SPF級大鼠飼料，飲用無(wú)菌水。換并給足量,自由飲用。1.1.2藥品試驗藥:萎胃湯(黃芪、黨參、當歸、白(2)饑飽失常:2d足量喂食, 1d停食,循環(huán)實(shí)施。術(shù)、甘草、枳殼石斛雞內金、山楂、三七莪術(shù)),由3個(gè)月后,隨機抽取5只動(dòng)物,脫頸椎處死動(dòng)廣東省第二中醫院中藥房提供,單味顆粒劑由廣東物,迅速取胃。經(jīng)病理組織學(xué)檢查,判斷動(dòng)物造模省-方制藥廠(chǎng)生產(chǎn);對照藥:胃復春片(成分為紅情況。造模成功標準:參照《中藥(新藥)臨床研究參、香茶菜、炒枳殼等),杭州胡慶余堂藥業(yè)有限公指導原則》(2002)中GAG的病理診斷標準,經(jīng)病理司生產(chǎn),國藥準字:2000003，批號:090604。確診:①固有腺體萎縮;②黏膜肌層增厚;③可有腸1.2方法上皮化生或假幽門(mén)腺上皮化生;④固有膜炎癥;⑤1.2.1MNNG飲用液配制用滅菌自來(lái)水將MNNG可有淋巴濾泡中國煤化工配制成10mg/L濃度的儲存液，避光冷藏保存，用時(shí)CAG動(dòng)物MHCNMHG10只/組,將.將其配成1500ug/mL的飲用液,裝人200mL的飲造模動(dòng)物按體重隨機均分為模型組、胃復春組.69●江西中醫學(xué)院學(xué)報2013 年第25卷第3期(0.54g/kg)萎胃湯高(20.8 g生藥kg).中(10.4 g生與 胃復春組相比,萎胃湯低劑量組大鼠胃液胃液總藥/kg)、低(5.2 g生藥Akg)劑量組(分別為4、2、1倍臨酸度無(wú)顯著(zhù)性差異(P>0.05),萎胃湯低劑量組大鼠床等效劑量)。血清胃泌素含量有顯著(zhù)性升高(P<0.01),萎胃湯1.2.4給藥方法各組大鼠按劑量灌胃給藥, 10mU高、中劑量組大鼠胃液胃液總酸度和血清胃泌素含kg,1次/d,空白對照組給予等體積蒸餾水。連續12周。量均顯著(zhù)性升高(均P<0.01)。1.2.5指標檢測與標本采集測定胃酸、血清SOD活表1萎胃湯對CAG大鼠PH值、總酸度、胃泌素含量的影響(:s)性、MDA、胃泌素含量。胃液血清胃泌素分組胃酸測定;于末次給藥后,大鼠禁食24 h,禁水pH值總酸度/mmol●L'/pg* mL"8h,眼眶采血;用25%烏拉坦腹腔注射麻醉,剖腹,空白組2.110.52150.60+14.87*** 145.58738*結扎幽門(mén)賁門(mén),取出全胃,沿胃大彎剖開(kāi)胃腔,傾模型組5.17+0.52**75.454.53**173.89+8.71**H出內容物,用5.0mL生理鹽水沖洗,收集于沖洗液胃復春組4.48+0.45** 95.86+3.84***95.17*7.21**于離心管中,3 000 rpm離心20 min,吸取上清液1.0高劑量組299+9.49** 132.56+12.92** 129.85+5.27mL,用PH計測量pH值,計算原胃液PH值;二步滴中劑量組3.43+0.43**+}120.6410.84**5 120.53+13.18**附定法"測胃液總酸度。將血液于3000mmp離心10min,吸取血清。嚴格按照試劑盒說(shuō)明書(shū),測定血低劑量組4.27+0.57**105.45+8.90**112.89+7.17**m注:與空白組比較, *P<0.05, **P<0.01;與模型組#P<0.05,#P<0.01;清中的SOD活性、胃泌素、MDA含量。與胃復春組比較,&P<0.05,98P<0.01.1.3 統計方法2.3對大鼠血清SOD(超氧化物歧化酶)活性和計量資料多組間均數的比較先采用單因素方MDA(丙二醛)含量的影響差分析,方差齊時(shí) ,以均值加減標準差(xs)表示 ,組與空白對照組相比較,模型組CAG大鼠血清實(shí)驗間的均數兩兩比較用SNK法;方差不齊時(shí),以平均SOD活性顯著(zhù)降低(P<0.01);與模型組相比較,胃研秩次、下四分位數、中位數和上四分位數R(Ps,Po,復春組和萎胃湯高、中低3個(gè)劑量組SOD活性顯著(zhù)Ps)表示,多組間平均秩次比較用Kruskal-Wallis秩升高(均P<0.01);與胃復春組相比較,萎胃湯高劑和檢驗,組間平均秩次的兩兩比較用Mann-Whit-量組SOD活性顯著(zhù)升高(P<0.01),萎胃湯中、低劑neyU法。以上數據均由SPSS15.0完成, a=0.05。量組SOD活性亦有升高但無(wú)統計學(xué)意義(P>0.05)。2研究結果與空白對照組相比較,模型組CAG大鼠MDA2.1 一般情況顯著(zhù)升高(P<0.01);與模型組相比較,胃復春組和CAG模型大鼠精神萎靡眼睛無(wú)神、活動(dòng)緩慢,萎胃湯高、中、低3個(gè)劑量組MDA顯著(zhù)降低(均P<毛發(fā)色澤枯稿疏松粗糙豎毛、易脫落,食量減少，0.01);與胃復春組相比較,萎胃湯高劑量組MDA顯常有便溏、形體偏小，耳色淡白,拱背,喜扎堆,消著(zhù)降低(P<0.01) ,萎胃湯中、低劑量組MDA亦有降瘦、體重增加緩慢。治療期間,空白組未發(fā)現上述低但無(wú)統計學(xué)意義(P>0.05)。表現,各治療組大鼠經(jīng)治療后，其毛色、精神狀態(tài)、表2萎胃湯對CAC大鼠血清SOD和MDA的影響(xs)食欲、大便活動(dòng)情況等均有不同程度的改善,而以SOD/U. mL-+MDA/mmol.L:'萎胃湯高、中劑量組最好、萎胃湯低劑量組和胃復152.610.379.48+2.06*春組次之,模型組最差。97.84+9.95**116.88+1.06**#2.2對CAG大鼠胃液PH值、胃泌素的影響與空白對照組比較,各組大鼠胃液PH顯著(zhù)升胃復春組132.93+11.49**14.29+0.98**高(均P<0.01);與模型組相比,胃復春組、萎胃湯高劑量組150.1312.84"10.96+1.61*m高、中、低3個(gè)劑量組大鼠胃液PH均顯著(zhù)性降低中劑量組137.14912**12.961.83**(P<0.01);與胃復春組相比,萎胃湯高、中劑量組大低劑量組137.53+6.68***13.58+1.50**鼠胃液PH有顯著(zhù)性降低(均P<0.01),萎胃湯低劑注:與空白組比較, *P<0.05, *P<0.01;與模型組#P<0.05, #P<0.01;量組大鼠胃液PH降低不明顯(P>0.05)。與胃復春組比較,SP<0.05, 8sP<0.01.與空白對照組相比較,模型組大鼠胃液總酸度2.4不良事件發(fā)生率和血清胃泌素含量顯著(zhù)降低(P<0.01);與模型組相2組大| 中國煤化工匯、消化道出比,萎胃湯高、中、低3個(gè)劑量組和胃復春組大鼠胃血、血尿等的:MHCNMHG安全的藥物。液總酸度和血清胃泌素含量顯著(zhù)升高(均P<0.01);●70張倫等:萎胃湯對大鼠血清SOD活性MDA、GAS的影響研究3討論的診斷及藥物療效的判定,具有非常重要的意義。本研究采用以MNNG為主的加饑飽失常法復本研究提示萎胃湯各劑量組均能改善CAG模制CAG大鼠模型。造模開(kāi)始后6周大鼠即開(kāi)始出型大鼠的生存質(zhì)量:即大鼠的精神狀況、飲食量、活現活動(dòng)量、飲食量、體重、毛色、二便等方面的異常動(dòng)度、體重毛色、二便等- -般情況,且萎胃湯高、中變化,至12周時(shí)上述改變更加明顯,而且胃粘膜肉劑量組較對照藥胃復春為好。在改善胃液PH方眼觀(guān)和顯微鏡鏡下觀(guān)呈不同程度的萎縮、胃壁厚變.面,萎胃湯高、中、低3個(gè)劑量組大鼠均顯著(zhù)性降低薄、彈性降低、皺壁減少、黏膜色澤發(fā)白或變暗,有胃液PH值(P<0.01),且萎胃湯高、中劑量組較胃復出血點(diǎn)等情況的發(fā)生,符合人類(lèi)CAG的臨床和病理春組大鼠胃液PH值亦有顯著(zhù)性降低(均P<0.01)。特征。在胃酸分泌功能方面,萎胃湯高、中、低3個(gè)劑量組近年來(lái),超氧化物歧化酶(SOD)的防御和修復和胃復春組均升高了胃泌素的分泌情況(均有P<氧代謝產(chǎn)物的損傷作用得到了廣泛的重視,測定0.01),且萎胃湯高、中劑量組較胃復春組大鼠胃泌SOD可在一定程度上反映機體清除自由基能力的素亦有顯著(zhù)性升高(均P<0.01)。在抗氧化能力方大小。丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過(guò)氧化的最終分解產(chǎn)面亦有改善,萎胃湯3個(gè)劑量組均顯著(zhù)升高了SOD物,可與脂質(zhì)過(guò)氧化中間產(chǎn)物自由基損傷膜結構，活性(均P<0.01),降低MDA的含量(均P<0.01)。改變膜成分的活性及抗原性而影響膜的正常功通過(guò)實(shí)驗研究也可以看出，治療作用中以萎胃湯高能。因此, MDA水平是脂質(zhì)過(guò)氧化物損傷效應的特劑量效果最好;治療劑量呈現了一定的劑量正相關(guān)征性指標。蔣時(shí)紅等[5]在實(shí)驗中發(fā)現,慢性萎縮性關(guān)系。通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗研究進(jìn)--步闡明了萎胃湯治胃炎(CAG)大鼠模型血清和胃黏膜SOD水平明顯療慢性萎縮性胃炎的作用機制。下降,而MDA水平明顯升高,表明CAG大鼠脂質(zhì)過(guò)參考文獻氧化反應增強,超出了抗氧化系統的抗氧化能力,[1]白兆芝,張彥敏,張潤順,等胃安泰膠囊治疔慢性萎縮性胃炎癌頭使MDA增高,自由基代謝異常起著(zhù)重要作用。前病變的臨床研究[].上海中醫藥雜志,2005 ,39(2):16-17.研[2]陳云逸胃癌動(dòng)物模型研究進(jìn)展[].腫瘤基礎與臨床,2006.19究胃泌素主要由胃竇G細胞釋放,除存在于血液.(1):751.和組織中,也存在于胃液內,具有刺激胃酸分泌,促[3]雪輝,王建國.大鼠慢性萎縮性胃炎模型的建立[D張家口醫學(xué)使胃腸粘膜的蛋白質(zhì)、RNA、DNA的合成,促使胃腸院學(xué)報,2002, 19(2);11.粘膜的生長(cháng)與更新速度加快等作用。還能引起幽[4]陳奇.中藥藥理實(shí)驗方法學(xué){M]_北京:人民衛生出版社,1994:859門(mén)括約肌松弛,胃竇肌收縮,加快胃排空。在CAG[5]蔣時(shí)紅,劉旺根,王雪萍,等.黃芪建中湯對脾虛型慢性萎縮性胃時(shí)由于腺體萎縮,腸上皮化生,G細胞數量減少,炎大鼠血象、血液和胃黏膜生化指標的影響[]-中國中醫基礎醫CAS分泌下降，由于失去了激素的營(yíng)養作用,胃粘學(xué)雜志,2006, 12(4):279 -281.膜進(jìn)一步萎縮,腸化加劇,形成惡性循環(huán)。因此,檢(收稿日期:2013-03- -26)測胃酸、胃蛋白酶活性及血清胃泌素含量對于CAG新專(zhuān)欄征稿《江西中醫學(xué)院學(xué)報》(雙月刊)已全面改版,以下重點(diǎn)欄目面向全國征稿:●理論研究對中醫重大理論問(wèn)題進(jìn)行專(zhuān)題論述。討論專(zhuān)題有:中醫水理論研究、火理論研究、體質(zhì)學(xué)說(shuō)研究、夢(mèng)理論研究、病證理論研究?！癜偌覡庿Q旨在打破中醫學(xué)術(shù)界的沉悶局面,對中醫藥事業(yè)發(fā)展的重大問(wèn)題展開(kāi)討論爭鳴。爭鳴要求堅持良好的學(xué)術(shù)道德,敢說(shuō)真話(huà),敢亮觀(guān)點(diǎn)。爭鳴的主要內容有:中醫教育反思、中醫科技走向、中醫發(fā)展前景、中西醫結合前景、新時(shí)期中醫的生存模式等。.●中醫文化研究主要反映中醫與古代哲學(xué)、古代社會(huì )政治經(jīng)濟、人文地理等文化形態(tài)的研究成果以及五運六氣研究、生命學(xué)說(shuō)研究的最新動(dòng)態(tài)?！竦澜提t學(xué)研究包括道教醫藥文獻研究、道教醫藥人物研究、道教醫藥史研究、道教醫學(xué)理論研究、道教醫學(xué)方藥研究、道教醫學(xué)養生研究等,要求觀(guān)點(diǎn)正確,不違中國煤化工歡迎廣大作者踴躍投稿。YHCNMH G71 .