乙醇沉淀法提取茶花多糖的研究

2013年第5期蠶桑茶葉通訊乙醇沉淀法提取茶花多糖的研究江新鳳高其璋楊普香李文金劉彩霞張瑤(江西省蠶桑茶葉研究所330202)摘要:以荼花為硏究對象,以水為溶劑,在一定的條件下提取茶花多糖,提取液用乙醇進(jìn)行沉淀,選取沉淀劑用量、沉淀時(shí)間、離心時(shí)間和提取次數4個(gè)因素做單因素試驗,然后以離心時(shí)間、乙醇加入量、沉淀時(shí)間、提取次數作為因素,進(jìn)行正交試驗,來(lái)確定乙醇沉淀法提取茶花多糖的最佳工藝條件。乙醇沉淀法的最佳工藝條件為:濃縮液:沉淀劑為1:3、沉淀時(shí)間為6h,提取次數為2次。關(guān)鍵詞:乙醇;沉淀法;茶花;茶多糖;茶花多糖茶花是茶樹(shù)的重要組成部分,近幾年來(lái)對茶花時(shí)間為2h,提取溫度為90℃。提取液采用100目濾研究發(fā)現茶花多糖與茶葉多糖的許多性質(zhì)類(lèi)似。布粗濾,得到的上清液再用1000目濾布過(guò)濾。清本硏究旨在確定乙醇沉淀法提取荼花多糖的最佳工液300oκmin離心15πi,將兩次水提液合并濃縮,藝條件濃縮溫度60℃,濃縮至150mL,加2倍量體積分數的1材料與方法95%乙醇沉淀,3000r/min離心10min后去除上清液,重復3次,取沉淀烘干即得粗茶花多糖1.1材料1.2.3標準曲線(xiàn)的繪制硏究材料:安吉白茶茶花,采自江西省蠶桑茶葉精確稱(chēng)取葡萄糖標準物質(zhì)0.100g,加去離子水硏究所生態(tài)觀(guān)光茶園,新鮮茶花經(jīng)殺青后烘干備用。溶解,定容至250mL。配制成0.4mgmL的標準品主要試劑:95%乙醇貯備溶液。然后分別移取0、0.1、0.2、0.3、0.4主要儀器:AL-204電子天平,由梅特勒-托利0.5mL標準品貯備液加入具塞試管后,再用蒸餾水多儀器(上海)有限公司生產(chǎn);UV-9600紫外可見(jiàn)定容至1.0mL。則各管中葡萄糖的濃度分別為0、分光光度計,由日本島津公司生產(chǎn);玻璃儀器氣流烘0.04、0.080.120.160.20mg/mL干機,由陜西常儀實(shí)業(yè)公司生產(chǎn);TD5M臺式離心在配置好的各管中加入蒽酮一硫酸試劑4mL機,由長(cháng)沙湘智離心機儀器有限公司生產(chǎn);微波爐,立即搖勻,置于冰水中,之后于沸水浴中加熱7min烘箱,粉碎機,由吉首市中誠制藥機械廠(chǎng)生產(chǎn);RE用冷水迅速冷卻,放置10mn2,于620m處測定吸5203A旋轉蒸發(fā)儀,由上海振捷試驗設備有限公司光度(A。橫坐標為葡萄糖濃度(C),縱坐標為吸生產(chǎn);S邗B-3循環(huán)水多用真空泵,由鄭州杜甫儀器光度,得出標準曲線(xiàn)及回歸方程。廠(chǎng)生產(chǎn)。1.2.4粗茶花多糖得率計算1.2方法稱(chēng)取粗茶花多糖固體1g,用水溶解,定容到1.2.1茶花處理150mL,吸取1mL測定吸光度。樣品中茶多糖得率攤晾:新鮮茶花均勻放置,攤平,攤放厚度5cm,計算方法如下失水20%后殺青。粗茶花多糖得率(%)=[(C×V×f)/(W殺青:微波烘青,茶樹(shù)花攤放均勻,微波爐調至10°)]×100高火,5min后取出茶樹(shù)花。其中,C為茶花多糖提取液中葡萄糖濃度(mg/干燥:電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,定溫90℃,烘至足mL);V為茶花多糖提取物體積(mL);W為茶花的干。粉碎備用。質(zhì)量(g);f為換算因子。2.2茶花多糖制備1.3試驗設計桑茶葉總第167期條件下,設置沉淀劑為濃縮液的1倍、2倍和3倍,高,但2倍體積的95%乙醇用量效果最佳。探討沉淀劑用量對茶花多糖得率的影響。沉淀時(shí)間對茶花多糖得率的影響:其他條件相同情況下,設置不同的沉淀時(shí)間為2h、6h和12h探討沉淀時(shí)間對茶花多糖得率的影響。提取次數對茶花多糖得率的影響:設置提取次數為1次、2次和3次,其他條件相同情況下,探討提取次數對茶花多糖得率的影響。1.3.2正交試驗設計在單因素試驗的基礎上,利用SFS17.0進(jìn)行正95%乙醇用量(倍)交試驗設計,設計見(jiàn)表1,以茶花多糖得率為考察指圖2沉淀劑用量對茶花多糖提取效果的影響標,確定茶花多糖最佳工藝條件。2.2.2沉淀時(shí)間的影響表1茶花多糖提取工藝正交試驗試驗結果顯示,濃縮后的茶花多糖提取液,加入水平沉淀劑用量(A)沉淀時(shí)間(B)提取次數(D)等體積的沉淀劑后靜置2h,6h和12h后,2h沉淀時(shí)間制得的茶花多糖含量最高,2h和6h沉淀時(shí)間,1濃縮液1倍1次所得的產(chǎn)物稍少,但差異不明顯。具體如圖3所示。2濃縮液2倍3濃縮液3倍12h次2結果與分析定霹2.1葡萄糖標準曲線(xiàn)繪制以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標,吸光度為縱坐標繪制標準曲線(xiàn),見(jiàn)圖1,得到線(xiàn)性回歸方程y=7.8071x6001243,R2=0.9995。沉淀時(shí)間(h)圖3沉淀時(shí)間對茶花多糖提取效果的影響y=7.8071x-0.01242.2.3提取次數的影響R=0.9995趙米譽(yù)試驗結果顯示提取次數越多,越有利于茶花多糖的制得。具體如圖4所示:0.50.040.080.120.160.2葡萄糖濃度(mg/m1)圖1葡萄糖標準曲線(xiàn)2.2單因素試驗結果2.2.1沉淀劑用量的影響沉淀劑用量(試驗中采用95%乙醇為沉淀劑)提取次數(次)2013年第5期蠶桑茶葉通訊33圖4提取次數對茶花多糖提取效果的影響為沉淀劑用量>沉淀時(shí)間>提取次數。乙醇提取茶花多糖的最佳工藝條件為2.3正交試驗結果與分析A3B2C2,即濃縮液:沉淀劑=1:3,沉淀時(shí)間為6h由表2可知,各因素對茶花多糖提取率影響的提取2次,在此條件下,重復提取三次,得到茶花多大小順序為A>B>C,即影響茶花多糖得率的因素糖的平均值為10.37%。表2I9(33)正交試驗結果試驗號沉淀劑用量A沉淀時(shí)間B提取次數C得率%27.09367.3481:39.426.7.0137.497.5378.1837.8038.8637.6337.5302.4331700.3063結論時(shí),得出的較優(yōu)提取條件為:濃縮液:沉淀劑=1:3,沉淀時(shí)間為6h,提取2次。通過(guò)對采用不同提取工藝的茶花多糖得率進(jìn)行硏究,同時(shí)綜合考慮工藝的經(jīng)濟性和茶多糖得率,確參考文獻定較優(yōu)的提取茶花多糖方法為乙醇沉淀法,為茶花]周?chē)m,喻云春胡華健,等茶花與茶葉常規生化成分多糖的進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)提供依據。以茶花為原分析研究[J].茶葉,2000,35(2):85~86料,用蔥酮-硫酸法測定茶花多糖的含量,通過(guò)單2]闞建全食品化學(xué)M.北京:中國農業(yè)出版社,202因素試驗分別研究沉淀劑用量、沉淀時(shí)間、提取次數