羊棲菜乙醇提取物的抗氧化活性

第50卷第22期湖北農業(yè)科學(xué)2011年11月Hubei Agricultural SciencesNov. 2011羊棲萊乙醇提取物的抗氧化活性葉紅1,周春宏2,高蓓蕾2,王曉晴1,曾曉雄',楊效華,任德康1(1.南京農業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,南京21095;2江蘇省環(huán)境監測中心,南京210036)摘要:用體積分數70%的乙醇浸提羊棲菜( Sargassum fus forme)得到粗提物,將粗提物溶于去離子水再依次用有機溶劑萃取,得到氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和萃取后剩余物,測定粗提物和各萃取物的總多酚含量、維生素C和維生素E含量以及還原力。結果表明,正丁醇萃取物中的總多酚和維生素E含量較高,正丁醇萃取物和乙酸乙酯萃取物具有較強的還原力關(guān)鍵詞:羊棲菜( Sargassum fusiforme);抗氧化活性;總多酚;DPH中圖分類(lèi)號:Q9492885;R2842文獻標識碼:A文章編號:0439-8114(201122-4695-03Antioxidant Activities in Vitro of Ethanol Extract from Sargassum fusiformeYE Hong, ZHOU Chun-hong GAO Bei-lei, WANG Xiao-qing, ZENG Xiao-xiong, YANG Xiao-hua, REN De-kang'(1. College of Food Science and Technology, Nanjing Agriculture University, Nanjing 210095, China2 Jiangsu Environmental Monitoring Center, Nanjing 210036, China)Abstract: Crude extract (CE) of Sargassum fusiforme was obtained using 70% ethanol as extracting solvent, dissolved indistilled water and then fractionated by inorganic solution including chloroform (Cf), ethyl acetate (EtOAc), and n-butanoln-BuOH)orderly; Four fractions of Cf, EtOAc, n-BuOH and aqueous were collected. The antioxidant activities and con-tents of total polyphenols, vitamin C and E in CE and the four fractions were determined. Results showed that contents oftotal polyphenols and vitamin E were higher in n-BuOH fraction; While n-BuOH fraction and EtOAc fraction exhibited higher antioxidant activItyKey words: Sargassum fusiforme; antioxidant activity; total polyphenol; DPPH羊棲菜( Sargassum fusiforme)屬褐藻門(mén)馬尾藻抗氧化活性進(jìn)行系統分析,可為羊棲菜的綜合利用科,是暖溫帶-亞熱帶性海藻,主要生長(cháng)在太平洋北提供理論依據。部,在我國廣大海域都能生長(cháng)。酚類(lèi)化合物廣泛存在于此類(lèi)植物中,具有多種保健功能,其中最重要材料與方法的是抗氧化功能。它不僅對活性氧自由基具有很強1.1材料的捕捉能力,而且可以對由氧自由基誘發(fā)的生物大羊棲菜:購于山東威海青正食品有限公司分子損傷起到保護作用,具有明顯的抗突變、抗腫試劑:DPPH·(1,1-二苯基苦基苯肼)購于美國瘤、抗病毒、抗微生物、抗衰老等功能1。關(guān)于海藻Siga公司, Folin- Denis試劑、維生素C(VC)和維生中水、醇或脂溶性溶劑提取物的抗氧化活性報道甚素E(VE)試劑盒購于南京建成生物工程研究所,其多。研究表明褐藻多酚具有很強的自由基清除能余試劑均為國產(chǎn)分析純。力,是一類(lèi)在藥學(xué)、食品和日化等領(lǐng)域很有使用前試驗儀器:植物粉碎機(荷蘭 Philip公司),電子景的天然抗氧化劑和自由基清除劑8。國內有關(guān)羊天平BS210s(北京塞多利斯儀器系統有限公司),數棲菜中的多酚和抗氧化活性的研究較少。因此,以顯恒溫水浴鍋HH-6(常州國華電器有限公司),旋羊棲菜為原料,對其萃取物總多酚、維生素含量及轉蒸發(fā)儀(德國 Heidolph公司),臺式離心機Anke收稿日期:2011-03-21基金項目:南京農業(yè)大學(xué)青年科技創(chuàng )新基金(Y200415)作者簡(jiǎn)介:葉紅(1975-),女,江蘇南京人,副教授,博士,主要從事生物物質(zhì)分離及分析的研究,(電話(huà))13645170320(電子信箱)4696湖北農業(yè)科學(xué)011年TDL-5(上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)),722S可見(jiàn)分光光度陽(yáng)性對照。同時(shí)作樣品空白試驗,即將0.1mL樣液計(上海精密科學(xué)儀器有限公司),冷凍干燥機與3.0mL無(wú)水乙醇混合,按上述條件進(jìn)行同樣的操ALPHA1-2(德國 Martin christ公司)。作,測定517mm處的吸光度A20對DPH清除率的1.2方法計算公式:清除率=[1-(A1-A2)Ab]×100%。1.2.1羊棲萊粗提物和各萃取物的制備取羊梄1.2.5HO2清除率的測定取不同濃度樣品溶液菜200g,清水洗凈剪碎,在30℃烘箱中烘干,用植1.0mL于試管中,分別加入2.4mL磷酸鹽緩沖液物粉碎機打成粉末,用2L70%(體積分數,下同)的(0.mol/,pH74)和06mLHO2溶液(40mmo/),乙醇浸提。離心后取上清液,真空濃縮,凍干得粗提混勻,反應10min后,測230m處的吸光度A1,以物,將粗提物溶于去離子水,再依次用氯仿、乙酸乙VC作陽(yáng)性對照。以去離子水代替樣液,按上述條件酯、正丁醇萃取,濃縮凍干,分別得到氯仿萃取物、進(jìn)行同樣的操作,測230m處的吸光度A,同時(shí)做乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和萃取后剩余物,樣品空白試驗,即以去離子水代替HO2溶液,按上流程見(jiàn)圖述條件進(jìn)行同樣的操作,測230mm處的吸光度A2。以去離子水代替樣液和HO2溶液,做參比試驗調零羊棲菜70%乙醇浸提用。對HO2清除率的計算公式:清除率=[Aa-(AA2)]/A100%。1:1(體積比)氯仿萃取3次1.2.6還原力的測定取不同濃度樣品溶液1.0mnL于試管中,分別加入1.0mL磷酸鹽緩沖液(0.2氯仿萃取物1:1(體積比)乙酸乙酯mol/L,pH6.6)和1.0mLKe(CN)6溶液(0.03mol/L),混勻,50℃水浴20min,取出后迅速冷卻,加10mL三氯乙酸溶液(0.6mol/L),混勻,再加0.2乙酸乙酯萃取物1:1(體積比)正丁醇萃取3次mL Fecl3溶液(6mmol/L),混勻,10min后于700nm處測其吸光度A1,以VC作陽(yáng)性對照。同時(shí)做樣品空白試驗,以去離子水代替FeCl3溶液,于700mm正丁醇萃取物萃取后剩余物處測其吸光度A2。以去離子水代替樣液和FeCl3溶圖1羊棲菜粗提物和各萃取物的制備流程液做參比試驗調零用。以吸光度(A1-A2)表示樣品的1.2.2總多酚含量的測定( Folin- Denis法)標準還原力。吸光度越大,表明還原力越強。曲線(xiàn)的制作:稱(chēng)取25.0mg間苯三酚,用去離子水完全溶解,定容至25mL容量瓶中配制成濃度為102結果與分析g/m的間苯三酚溶液,分別取0、0.050.150.25、21羊棲菜粗提物及各萃取物的得率0.35、045mL間苯三酚溶液,加去離子水稀釋至7羊棲菜經(jīng)70%乙醇浸提后得到粗提物,粗提物mnL混合均勻,加入 I mL Folin- Denis試劑搖勻,3依次用不同有機溶劑萃取后得到氯仿萃取物、乙酸后加入2mL0.7moL的Na2CO3溶液,混合充乙酯萃取物、正丁醇萃取物及萃取后剩余物,將其分測定710m處吸光度,以吸光度為縱坐標,間苯濃縮凍干,粗提物及各萃取物的得率(質(zhì)量比)、總三酚濃度為橫坐標作圖,得標準曲線(xiàn)。樣品總多酚多酚含量、VC和VE含量見(jiàn)表1。由表1可知,氯仿含量的測定:將粗提物和各萃取物配成適當濃度的萃取物和萃取后剩余物的得率較高,而乙酸乙酯萃溶液,按上述步驟操作,測定η10m處吸光度,樣品取物和正丁醇萃取物的得率較低。正丁醇萃取物的中總多酚含量以每克干重含有的間苯三酚含量表總多酚含量較高,乙酸乙酯萃取物、粗提物和萃取示,單位是mg/go后剩余物中的總多酚含量較接近,氯仿萃取物中的1.2.3VC和VE含量的測定(啡羅啉法)粗提物總多酚含量較低。萃取后剩余物中的VC較高,各萃和各萃取物中ⅤC和ⅤE的含量使用試劑盒測定取物的VE含量為:正丁醇萃取物>萃取后剩余物>1.2.4DPPH·清除率的測定將O.1mL無(wú)水乙醇乙酸乙酯萃取物>氯仿萃取物>粗提物。與3 mL DPPH·無(wú)水乙醇溶液(1×10-mol/L)混合,2.2DPPH的清除率搖勻,以無(wú)水乙醇調零,測517mm處的吸光度AoDPPH·是一種穩定的自由基,廣泛用于評價(jià)抗再將01mL樣品溶液(稀釋至不同濃度)與3mL氧化物質(zhì)的清除自由基活性。DPH·具有單電子DPPH·無(wú)水乙醇溶液混合,搖勻,30℃暗處反應30在517mm處有強吸收(呈深紫色),當有自由基清除min,測517m處的吸光度A,以綠原酸(CHA)作劑存在時(shí),自由基清除劑與其單電子配對而使其光第22期葉紅等:羊棲菜乙醇提取物的抗氧化活性4697表1羊棲菜粗提物及各萃取物的得率、總多酚含量一氯仿萃取物C和VE含量丁醇提取物得率(質(zhì)量比)總多酚含量VC含量VE含量粗提物樣品←萃取后剩余物*一乙酸乙酯萃取物粗提物8.003.80氯仿萃取物30.3714317.50480乙酸乙酯萃取物1.0正丁醇萃取物濃度/mg/mL萃取后剩余物21.2114.06.20圖3粗提物及各萃取物對HO2的清除率吸收逐漸消失,其退色程度與其所接受的電子數成乙酸乙酯萃取物正丁醇提取物定量關(guān)系,因而可用分光光度法進(jìn)行定量分析。粗一粗提物提物及各萃取物對DPPH的清除率見(jiàn)圖2氯仿萃取物一萃取后剩余物由圖2可見(jiàn),正丁醇萃取物和乙酸乙酯萃取物在低濃度時(shí)對DPPH…的清除率較高,而氯仿萃取物和萃取后剩余物對DPPH·的清除率較低。粗提物和00.51.01.5各萃取物的清除率均隨著(zhù)濃度的增加而增加。特別濃度/mg/mL圖4粗提物及各萃取物的還原力是粗提物對DPPH·的清除率隨濃度的變化較明顯陽(yáng)性對照綠原酸在濃度為0.1mg/mL時(shí)對DPH·物>萃取后剩余物>氯仿萃取物。粗提物及各萃取物清除率為29.81%。的還原力均隨著(zhù)濃度的增加而提高,而氯仿萃取物的還原力隨樣品濃度的增加時(shí)變化較小。陽(yáng)性對照2s0粗提物丁醇萃取物VC在濃度為8共g/m時(shí)Amom為0.364萃取后剩余物氯仿萃取物3小結乙酸乙酯萃取物1)羊棲菜的氯仿萃取物和萃取后剩余物的得率較高,而乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物的得率01.0較低。正丁醇萃取物中總多酚含量較高,為26.38濃度/mgm圖2粗提物及各萃取物對DPPH的清除率mg/g,正丁醇萃取物中VE含量最高,萃取后剩余物中ⅤC含量最高。23H2O2的清除率2)測定了羊棲菜粗提物和各萃取物的還原力,HO,在230m處有最大吸光度,若與樣品反結果表明正丁醇萃取物具有較好的清除DPH·的應,其吸光度將會(huì )降低,因此其吸光度越低,表明樣能力和清除HO2的能力,乙酸乙酯萃取物的還原力品清除HO2的能力越強。粗提物及各萃取物對較強。正丁醇萃取物和乙酸乙酯萃取物的還原力較HO2的清除率見(jiàn)圖3。由圖3可見(jiàn),在濃度大于0.5強,這可能與萃取物中含有較多的活性總多酚有關(guān)。g/m時(shí),正丁醇萃取物對HO2的清除率最高,其參考文獻:次是氯仿萃取物,萃取后剩余物和乙酸乙酯萃取物世界科技研究與發(fā)展,2005,27(5):56-63對HO2的清除率較低。粗提物及各萃取物對HO2[2]魏玉西,郭道森,牛錫珍,等.褐藻中多酚化合物的研究進(jìn)展[J]的清除率隨濃度的變化不太明顯。陽(yáng)性對照VC在(31圖惠成,張高的利用與開(kāi)發(fā)1食品科技,986濃度為05mg/m時(shí)對HO2的清除率為92%。4還原力的測定[4] ALBERTUS J S. Medicinal and pharmaceutical uses of seaweedatural products: A review [J]. Journal of Applied Phycology還原力測定的原理即樣品能將赤血鹽[KFe2004,16(4):245-262(CN)6還原成黃血鹽[KFe(CN)6],黃血鹽再與Fe2[5]李偉,張應團.火棘多酚類(lèi)物質(zhì)的體外抗氧化作用[J].食品作用生成普魯士藍,在700m波長(cháng)測定吸光度,以61石碧狄瑩植物多酚N2,北京,科學(xué)出版社.0檢測普魯士藍的生成量,Amm越高,表示樣品還原水生生物學(xué)報,1999,23(5):494499力越強。圖4顯示了粗提物及各萃取物的還原力。[8]魏玉西,于曙光.兩種褐藻乙醇提取物的抗氧化活性研究海洋科學(xué),2002,26(9):49-51由圖4可見(jiàn),在相同濃度時(shí),粗提物及各萃取物的91嚴小軍.中國常見(jiàn)褐藻的多酚含量測定[J.海洋科學(xué)集刊,還原力為:乙酸乙酯萃取物>粗提物>正丁醇萃取1996,37(10):61-65