生物素中有關(guān)物質(zhì)的HPLC法測定

中國醫藥工業(yè)雜志 Chinese Journal of Pharmaceuticals2014,45(11)生物素中有關(guān)物質(zhì)的HPLC法測定陳雪帆3,胡楚楚冫,趙盼盼2,鄭國鋼(1.浙江工業(yè)大學(xué)長(cháng)三角綠色制藥協(xié)同創(chuàng )新中心,浙江杭州310014:2.浙江省食品藥品檢驗研究院,浙江杭州310004;3.杭州艾品醫藥科技有限公司,浙江杭州310014)摘要:建立了高效液相色譜法測定生物素的有關(guān)物質(zhì)。采用C1色譜柱,以16.7 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH29):甲醇為流動(dòng)相,梯度洗脫,檢測波長(cháng)210nm。在上述色譜條件下生物素與各中間體及降解產(chǎn)物均能有效分離,4種已知有關(guān)物質(zhì)在1~20ug/m1范圍內線(xiàn)性關(guān)系良好,平均回收率為933%~99.3%,最低檢測限分別為0.365、0.280、0.255和0.480μgml關(guān)鍵詞:生物素;有關(guān)物質(zhì);高效液相色譜:測定中圖分類(lèi)號:O65772:TQ460.72文獻標志碼:A文章編號:1001-8255(2014)11066-04Determination of Related Substances in Biotin by hPlcCHEN Xuefan", HU Chuchu, ZHAO Panpan, ZHENG Guogang(1. Zhejiang University of Technology Collaborative Innovation Center of Yangtze River Delta Region Green Pharmaceuticals, Hangzhou 3100142. Zhejiang Institute for Food and Drug Control, Hangzhou 310004; 3. Hangzhou Irvine Pharmaceutical Services, Hangzhou 310014)ABSTRACT: An HPLC method was established for the determination of the related substances in biotin. A CI8column was used, with the mobile phase of PBS (16.7 mmol/L, pH 2.9): methanol by gradient elution, at the detectionwavelength of 210 nm. Biotin and the related substances were well separated. The calibration curves for related substancesA-D were linear in the range of 1-20 Hg/mL. Their average recoveries were 93.3%-99.3%, and the low limits ofdetection were 0.365, 0.280, 0. 255 and 0.480 ug/ml, respectivelyKey words: biotin; related substance; HPLC; determination生物素(1)是多種羧化酶的輔酶,在羧化酶反效果好,專(zhuān)屬性強,方法簡(jiǎn)便。應中起CO2載體的作用,它以游離形式或與蛋白1儀器與試劑質(zhì)結合的形式廣泛分布于動(dòng)植物組織中(2。除經(jīng)典1260型組合式全自動(dòng)高效液相色譜儀,含G1311B型的合成路線(xiàn)外,另有采用(3aS,6aR)-六氫-2-氧四元泵、G4212B型二極管陣列紫外檢測器和G1329BALS代-1,3-二芐基-1H噻吩并[3,4-d咪唑-4烯戊酸型自動(dòng)進(jìn)樣器(美國 Agilent公司)。為原料,通過(guò)氫化、脫芐、環(huán)合制得15,該合成1對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號過(guò)程中會(huì )產(chǎn)生有關(guān)物質(zhì)A~D,結構式見(jiàn)圖1。歐100291-200402);1原藥(含量994%,批號120701;含量洲藥典8.0版(EP8.0)采用TLC法控制1(經(jīng)典路93%,批號120702和120703)及有關(guān)物質(zhì)A~D(色譜線(xiàn))中的有關(guān)物質(zhì)。1含量及有關(guān)物質(zhì)測定已有報純度均大于95%)均由浙江圣達藥業(yè)有限公司提供。甲醇道均不能有效測定后一種方法中產(chǎn)生的有關(guān)乙醇為色譜純,磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純,水為重蒸水。物質(zhì)A~D。故本研究建立了HPLC法測定,分離2方法與結果21溶液制備收稿日期:201402-13:修回日期:201409-08作者簡(jiǎn)介:陳雪帆(1978-),男,副教授,從事化學(xué)藥物的質(zhì)量研供試品溶液:精密稱(chēng)取1原藥適量,加50%乙宄與控制,藥品質(zhì)量標準的制訂、復核及生物利用度的研究等。醇溶解并稀街m1的淀跡,搖勻,作為供Tel:013819183280試品溶液。中國煤化工E-mail:xfchen@aliyun.comCNMHG中國醫藥工業(yè)雜志 Chinese Journal of pharmaceuticals2014,45(11)1067人COOHy-cHeCOOCH,圖1有關(guān)物質(zhì)A~D的結構Fig 1 Structures of Related Substances A-D系統適用性溶液:分別精密稱(chēng)?、駥φ掌放c靈敏度,使有關(guān)物質(zhì)A色譜峰的峰高約為滿(mǎn)量程有關(guān)物質(zhì)A~D100mg,各置100ml量瓶中,加的20%;調節流速使1色譜峰的保留時(shí)間約7~50%乙醇溶解并定容,搖勻;精密量取上述溶液各10min,各組分出峰順序依次為1、有關(guān)物質(zhì)A、B、m,置同一100ml量瓶中,加流動(dòng)相定容,搖勻,C和D,1與各有關(guān)物質(zhì)的分離度應符合規定;理制成混合溶液(0μgm),作為系統適用性溶液。論板數按1峰計不低于3000。色譜圖見(jiàn)圖2?？梢?jiàn)22色譜條件與系統適用性試驗各色譜峰分離完全,理論板數以1峰計大于4000色譜柱 Agilent CIt8柱(46mm×250mm,5um)23專(zhuān)屬性試驗流動(dòng)相16.7mmol/L磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀取本品50mg,共5份,各置50m1量瓶中227g,加水至IL,用磷酸調至pH2.9;A)∶甲醇加50%乙醇5ml搖勻,分別進(jìn)行酸、堿、氧化、(B),梯度洗脫(程序見(jiàn)表1);流速1.0ml/min:檢強光和高溫破壞,分別取上述溶液用50%乙醇定容測波長(cháng)210m:進(jìn)樣量20μl。(酸、堿破壞樣品須中和),搖勻,進(jìn)樣。結果表明,1峰與各中間體、降解產(chǎn)物峰分離良好,1在表1梯度洗脫程序酸、堿性條件下較不穩定,1與主要降解產(chǎn)物均在Tab 1 Gradient elution Procedure210nm波長(cháng)附近有較大吸收0→875:2524線(xiàn)性試驗8→3575:25→20:80精密稱(chēng)取1對照品和有關(guān)物質(zhì)A~D適量,20:8020:80→75:25加50%乙醇溶解并稀釋,制成1、2.5、5、7.5、10、15和20中國煤化工,記錄色譜圖。取系統適用性溶液注入液相色譜儀,調節檢測以濃度c為CNMHGNA,進(jìn)行線(xiàn)性回中國醫藥工業(yè)雜志 Chinese journal of pharmaceuticals2014,45(l1)A:系統適用性溶液,B:供試品溶液1-1;2-有關(guān)物質(zhì)A;3-有關(guān)物質(zhì)B:4-有關(guān)物質(zhì)C;5-有關(guān)物質(zhì)D圖2典型色譜圖Fig 2 Typical Chromatograms歸,得回歸方程。1:A=8.004c-0.192,r09998;表21有關(guān)物質(zhì)測定結果%有關(guān)物質(zhì)A:A=40.784c-2.204,r=0.9999;B2 The Results of Related Substances in 1 1%A61.327c-2873,r0.9999;C:A=56.389c-3.444,有關(guān)物質(zhì)A單一未知雜質(zhì)未知雜質(zhì)總量雜質(zhì)總量0.140.120.130.27r=09999;D:A=51461c-4486,r=0.9998。表明0.120.130.270.120.251和有關(guān)物質(zhì)A~D在1~20μg/ml濃度范圍內注:"有關(guān)物質(zhì)B、C、D均未檢出線(xiàn)性關(guān)系良好。最低檢測限(LLOD)分別為0.395、0.365、0.280、0.255和0480μgml3討論2.5穩定性試驗1為水溶性維生素,而其合成工藝中產(chǎn)生的中取供試品溶液分別于室溫放置0、2、4、6、8間體雜質(zhì)脂溶性較強,且有關(guān)物質(zhì)B、C結構相近,和16h后進(jìn)樣測定,有關(guān)物質(zhì)總峰面積的RSD>采用HPLC等度法難以洗脫各雜質(zhì),故采用梯度洗15%,表明供試品溶液應臨用新制脫,分離良好26回收率試驗經(jīng)對1、有關(guān)物質(zhì)A~D及各降解產(chǎn)物峰進(jìn)精密稱(chēng)取1原藥0.1g,置100ml量瓶中,分行UⅤ掃描,結果均為末端吸收,參考文獻方法選別加入雜質(zhì)A~D適量,制備低、中、高濃度質(zhì)擇210nm波長(cháng)處測定6。分別比較乙腈與甲醇為控溶液(相當于主成分的004%、0.2%和0.3%),流動(dòng)相有機相(7,結果顯示乙腈為有機相時(shí)空白加50%乙醇溶解并定容,搖勻,取溶液進(jìn)樣測定。溶劑圖譜中干擾峰較多,故選用沒(méi)有干擾峰的甲醇。有關(guān)物質(zhì)A~D的平均回收率為93.3%~99.3%,逐步調節流動(dòng)性中有機相和水相比例,使各有關(guān)物RSD為30%~54%(n=9)。質(zhì)在平緩梯度坡度出峰,并使有關(guān)物質(zhì)B、C有效27有關(guān)物質(zhì)測定分離。同時(shí),取不同pH值(20~50)的磷酸鹽緩精密吸取供試品溶液進(jìn)樣,記錄色譜圖,供試沖液進(jìn)行試驗,結果緩沖液pH值基本不影響各雜品溶液的色譜圖中如有與上述有關(guān)物質(zhì)保留時(shí)間一質(zhì)出峰。由于1在酸性條件下較穩定,故參照文獻致的色譜峰,采用外標法計算有關(guān)物質(zhì),單個(gè)已知選擇pH29進(jìn)行試驗有關(guān)物質(zhì)均不得超過(guò)0.5%;其他單個(gè)有關(guān)物質(zhì)峰采用本法測定特定雜質(zhì),LLOD可達0.025%。面積不得大于對照溶液主峰面積的1/2(0.5%);各EP80/BP2013均采用TLC法測定有關(guān)物質(zhì),規有關(guān)物質(zhì)峰面積之和不得大于對照溶液主峰面積定單個(gè)雜質(zhì)小于0.5%,且最多允許一個(gè)雜質(zhì)大于(1.0%)。結果單個(gè)有關(guān)物質(zhì)含量均小于0.2%,有0.25%,可見(jiàn)采用本法檢測靈敏度顯著(zhù)提高,能有關(guān)物質(zhì)總量均小于0.4%。結果見(jiàn)表2效測定樣V凵中國煤化工CNMHG中國醫藥工業(yè)雜志 Chinese Journal of pharmaceuticals2014,45(l)鹽酸決奈達隆中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的GC-MS法測定丁逸梅,吳娟,陸春曉,崔萍,王德才(1.南京工業(yè)大學(xué)江蘇省藥物研究所,江蘇南京210009:2.南京工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院,江蘇南京211816)摘要:建立了氣相色譜-質(zhì)譜法同時(shí)測定鹽酸決奈達隆中的甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯。采用TR-5MS毛細管柱,載氣為氦氣,電子轟擊離子化(ED)離子源、正離子模式檢測。甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯在0.7~10μgm范圍內線(xiàn)性關(guān)系良好,平均回收率為9421%和9535%,RSD為3.79%和267%關(guān)鍵詞:鹽酸決奈達隆:甲磺酸甲酯:甲磺酸乙酯:氣相色譜-質(zhì)譜:測定中圖分類(lèi)號:O65771:TQ46072文獻標志碼:A文章編號:1001-8255(2014)1-1069-03Determination of Methylmesy late and ethy mesylate inDronedarone Hydrochloride by GC-MsDING Yimei", wU Juan, LU Chunxiao, CUI Ping", WANG Decai(1. Jiangsu Provincial Institute of Materia! Medica, Nanjing Tech University, Nanjing 210009:2. School of Pharmaceutical Sciences, Nanjing Tech University, Nanjing 211816ABSTRACT: A GC-MS method was established for the determination of methylmesylate(MMS)and ethyl-mesylate(EMS)in dronedarone hydrochloride. A TR- 5MS capillary column was used, with helium as the carrier gasElectron impact ionization (EI)source was employed and two analytes were detected under the positive ion mode. Thcalibration curves of MMS and EMS were linear in the range of 0.7-10 ug/mL. Their average recoveries were 94.21%and 95.35%, with RSDs of 3. 79% and 2.67%, respectively.Key Words: dronedarone hydrochloride; methylmesylate; ethylmesylate; GC-MS; determination鹽酸決奈達隆(1)是由法國 Sanofi- Aventis公于2009年7月在美國上市。筆者曾對該藥物進(jìn)司開(kāi)發(fā)的抗心律失常藥,其片劑(商品名 Multaq3)行了有關(guān)物質(zhì)研究(2),本試驗主要研究本品在合成收稿日期:2014-05-14過(guò)程中可能產(chǎn)生的基因毒性雜質(zhì)。1的合成工藝中作者簡(jiǎn)介:丁逸梅(1974-),女,副研究員,從事藥品質(zhì)量標準最后一步反應是甲磺?；?35,甲磺酰氯可能與甲研究醇或乙醇反應生成副產(chǎn)物甲磺酸甲酯(MMS)或甲Tel:013851670425E-mail:jsyws@njtech,edu.cn磺酸乙酯(EMS)。甲磺酸酯屬基因毒性雜質(zhì),限哈吼吼嗡吼吼吼吼吼嗡吼吼嗡吼吼吼嗡吼吼嗡吼峒吼吼峒吼吼吼峒吼嗡吼吼嗡嗡參考文獻:[J.有機化學(xué),2012,32(10):179218021]陳宏,張克英.生物素的免疫功能研究進(jìn)展[J].飼料與5]劉美星,孫武軍,莫一平.一種催化脫雙芐合成d生物素畜牧,2008,(9):42-44的方法:中國,102786531A[P].2012-11-21[2]張旭暉,王恬.生物素營(yíng)養生理作用及其應用研究進(jìn)展6]陳建輝,潘一斌,陳斌.d生物素有關(guān)物質(zhì)的HPLC測定[J.中國飼料,2010,(8):5-8「J.中國醫藥工業(yè)雜志,2009,40(5):368-373] Corey EJ, Mehrotra mm. A simple and enantioselective[7]杜碧堂,劉麗芳.注射用水溶性維生素中生物素含量測定synthesis of (+)-biotin [J]. Tetrahedron Leff, 1988, 29(1)方法改進(jìn)[J.臨床合理用藥雜志,2010,(2):11-1357-60[8]中華人民共且中華人民共和國衛生中國煤化工[4]鐘錚,武雪芬,陳芬兒.(+)-生物素全合成研究新進(jìn)展部藥品CNMHG