血清中甲醇和乙醇的氣相色譜法測定

中華勞動(dòng)衛生職業(yè)病雜志2005年2月第23卷第1期 Chin J Ind Hyg Occup Dis,June2005,vol23,No,1監測與檢驗技術(shù)血清中甲醇和乙醇的氣相色譜法測定劉軍生杜書(shū)明錢(qián)義【摘要】目的建立血清中甲醇、乙醇快速測定的氣相色譜方法。方法抽取靜脈血10ml,取10ml靜脈血,待血液凝固后離心分離血清,取1.0μ血清直接進(jìn)樣,采用玻璃填充柱分離樣品中的甲醇和乙醇外標法定量。結果血清中甲醇、乙醇最低檢出濃度均為0.50g/ml,線(xiàn)性范圍分別為0.005~0.400和0.10~3.95mg/m,回收率分別為98.0%~102.0%和98.0%~103.7%。相對標準偏差(RSD)分別為200%-637%和3.18%~5.83%。結論血清中甲醇、乙醇的氣相色譜測定方法能將甲醇和乙醇很好分別測定,可應用于甲醇、乙醇中毒的臨床診斷和治療【關(guān)鍵詞】甲醇,乙醇,血清;測定,氣相色譜法職業(yè)接觸甲醇和乙醇的工人體檢、酒后駕車(chē)事故責任鑒離度和靈敏度而言,SE54毛細管柱優(yōu)于不銹鋼柱和玻璃柱,定、臨床上甲醇或乙醇中毒的診斷治療,都需要測定其甲醇但因毛細管柱內徑小柱效容易降低不宜用作血清經(jīng)常測定。和乙醇的血液濃度{。我們建立了血清中甲醇、乙醇快速測我們參考有關(guān)文獻1,從分離度、準確度和能否用血清直接定的氣相色譜法,以保留時(shí)間定性,外標法定量,操作簡(jiǎn)便,操作為目的,對401擔體(60~80目,85%)玻璃填充柱進(jìn)行結果準確,能使甲醇、乙醇很好分離。了試驗,結果在上述條件下,直接用血清1.0進(jìn)樣可以一、材料與方法到準確快速分離甲醇、乙醇的目的(圖1)。見(jiàn)甲醇、乙醇標1.儀器與試劑:CC9790型氣相色譜儀(浙江溫嶺福立分樣色譜圖析儀器有限公司),FID檢測器,N000色譜工作站(浙江大學(xué)2.線(xiàn)性范圍和檢出限:甲醇線(xiàn)性范圍為0.50-4000智能信息研究所),甲醇、乙醇標準液(色譜純)mg/ml,乙醇線(xiàn)性范圍為10.00~400.00mg/ml,甲醇、乙醇檢色譜條件:填充玻璃柱(2.0m×3.2mmID),填充401出濃度均為0.05mg/ml甲醇回歸方程:y=380x+79.83,r擔體(60-80目,85%),汽化室溫度200℃,檢測器溫度280=0.9997,乙醇回歸方程:9=480x+35.42,r=0,9987,此方℃,柱溫100℃按30℃/min升至210℃,保留2min,柱前壓法的靈敏度完全可以滿(mǎn)足對臨床酒精中毒的診斷和酒后駕01mPa,氫氣0.1mPa,空氣0.06mPa,高純氮做載氣,衰駛的判斷。減5。3.方法的回收率和精密度:配制0.79mg/m的甲醇和3.標準儲備液的配制:淮準確吸取甲醇0.10m(79mg)、3.95mg/ml的乙醇血清標準液各50ml,分別加入到甲醇本乙醇0.50ml(395mg)置于100ml容量瓶中,加血清(取自無(wú)底值為0.05m/m,乙醇本底值為025mg/ml的兩種標準液未有飲酒史的體檢健康者)至刻度配成100ml甲醇含量為中,使甲醇濃度(理論值)分別為0.10、0.135、0.200.30、0,4079mg/ml,乙醇含量為395mg/ml的混合標準液mg/ml,乙醇濃度(理論值)分別為0.50、1.00、2.00、2.50、3.004.標準曲線(xiàn)的繪制:取標準儲備液和不飲酒的正常人mg/ml,每個(gè)濃度準確進(jìn)樣1.0μl做6次平行實(shí)驗。結果表血清配成甲醇含量分別為0.00、0.05、0.10.、0.20、0.40、明:甲醇、乙醇各濃度回收率分別為98.0%-102%和98,0%060、0.79mg/ml和乙醇含量分別為0.00、0.25、0.50、1.00103.7%;相對標準偏差(RSD)分別為2.00%~6.37%和200、3.003.95mg/ml的甲醇一乙醇混合工作液各10.0ml。3.18%~5.83%準確吸取1.0μ進(jìn)樣。做6次平行實(shí)驗,分別記錄峰面積,65取平均峰面積為縱坐標(y),對應的標準濃度(x)為橫坐標6055繪制標準曲線(xiàn)樣品測定:抽取靜脈血1.0ml于試管中,待凝固后以4000r/min離心5min,取血清1.0山l進(jìn)樣。記錄峰面積,查標準曲線(xiàn),外標法定量。30二、結果與討論25中國煤化工1.毛細管氣相色譜法的建立:甲醇、乙醇測定方法很CNMHG多2,如化學(xué)法、酶法和氣相色譜法,但以氣相色譜法較簡(jiǎn)便、準確。通用色譜柱為GDx102(頂空法操作),但就其分作者單位:30000天津解放軍22醫院毒檢中心(劉軍生、杜書(shū)時(shí)間(t/min)秀數擂圖1甲醇、乙醇標樣色譜圖中華勞動(dòng)衛生職業(yè)病雜志2005年2月第23卷第1期 Chin J Ind Hyg Occup Dis, June200Vdl.23,No,14.血清空白試驗:空腹抽取不飲酒的男女各40人靜脈0.5h比較,差異無(wú)統計學(xué)意義(P>0.5),因此血樣采集后應血各1ml,按本法色譜條件直接取血清1.0μ進(jìn)樣。實(shí)驗表在3h內測定,放置時(shí)間超過(guò)3h逐漸下降結果偏低。明,不飲酒者血液中也含有微量的乙醇,且無(wú)性別差異。對6干擾實(shí)驗:在1ml空腹靜脈血中加進(jìn)0.10mg/m的甲80名不飲酒的正常人和206名酒精中毒患者血樣分析,甲醇和0.50mg/m的乙醇混合標準液離心后取血清首先做甲醇、乙醇正常參考范圍分別為0~0.8mg/ml和0,05-8.00醇、乙醇測定,而后將1ml血液混勻加入1md冰冷雙蒸水使mg/m(按95%可信限計算),酒精中毒乙醇含量一般為50~其溶血然后配制成含血紅蛋白5、10、20、40gL的溶血樣品,350mg/ml對于因酗酒引起的酒精中毒,血清乙醇含量明離心后分別取1d上清液進(jìn)樣。結果顯示,隨著(zhù)溶血程度加顯增高,對常年接觸甲醇的工人,應做動(dòng)態(tài)的甲醇濃度觀(guān)察,大,甲醇、乙醇含量逐步增高,說(shuō)明溶血對該方法有明顯干擾。甲醇濃度≥20mg/m應診斷為中毒。有資料報道甲醇中毒患者血清甲醇量>20mg/ml,酒精中毒患者血清乙醇量>50mg/ml。甲醇、乙醇中毒個(gè)體耐受性差異很大,本次報道的正1李影林,盧淑文.中華醫學(xué)檢驗全書(shū),北京:人民衛生出版社1997.3216-3218常參考值和中毒量范圍與有關(guān)資料報道基本一致3。2張黎軍,仲翠蓮氣相色譜法在甲醇和乙醇中毒診斷中的應用5.樣品穩定性:將做回收實(shí)驗所用的5個(gè)濃度的甲醇、乙中華預防醫學(xué)雜志,2000,34:52-533李煥德,許樹(shù)梧.急性中毒毒物檢測與診療湖南:湖南科學(xué)技醇血清標準液放置0.5、1.02.0、3.0、4.0h分別測定其含量。術(shù)出版社,2000.450605當樣品放置室溫(25℃)4h時(shí),甲醇、乙醇測定結果與前0.5h(收稿日期:2003-1203)結果比較,差異有統計學(xué)意義(P<0.01)。3h測定結果與前(本文編輯:楊德一)細菌生化鑒定和藥物敏感性檢測試劑盒的研制邢冬紅陳軍生孟穎胡志東劉曉春劉毅華【摘要】目的研制細菌生化鑒定與藥物敏感性測定兩項試驗同步進(jìn)行試驗的試劑盒,達到簡(jiǎn)易快速診斷的目的。方法根據美國臨床實(shí)驗標準化委員會(huì )( NCCLS)抗生素最低抑菌濃度(MC)測定法規山選擇氨芐霉素、頭孢唑啉、慶大霉素、丁胺卡那霉素、氧哌嗪青霉素、妥布霉素、頭孢噻吩、舒氨新、頭孢哌酮、頭孢三嗪和環(huán)丙沙星共12種抗生素和大腸桿菌(ATCC25922)傷寒和鼠傷寒沙門(mén)菌、黏質(zhì)沙雷菌、肺炎克雷伯菌,分離自門(mén)診及住院患者的大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、陰溝腸桿菌等共9株。取待測菌24h培養物,接種普通肉湯,35℃孵育4~6h,用9孔接種器蘸取菌液與檢測板對合接種。于35℃孵育18-24h后觀(guān)察結果。分別用傳統法(生化鑒定試驗法、藥敏試驗瓊脂稀釋法)作對照試驗。結果試劑盒法與試管法結果的符合率為95.4%,用試劑盒法與瓊脂稀釋法平行測定12種抗生素對50株菌種的MC兩種方法MC值符合率為753%,在±1稀釋度范圍內的符合率為958%結論采用試劑盒進(jìn)行試驗可以滿(mǎn)足臨床診斷需求【關(guān)鍵詞】細菌鑒定;測定試劑盒細菌生化鑒定與藥物敏感性測定是細菌學(xué)檢驗中兩個(gè)氨新、頭孢哌酮、頭孢三嗪和環(huán)丙沙星分別為市售商品抗生重要組成部分,長(cháng)期以來(lái)作為兩個(gè)獨立試驗分別進(jìn)行。近年素注射劑。來(lái),國外已有將兩項試驗合二為一同步進(jìn)行的商品化試劑盒3.菌種來(lái)源:(1)標準菌種:大腸桿菌(ATCC25922)、傷供應臨床,達到簡(jiǎn)易快速診斷的目的,但國內尚無(wú)類(lèi)似產(chǎn)品寒和鼠傷寒沙門(mén)菌、黏質(zhì)沙雷菌、肺炎克雷伯菌購自衛生部問(wèn)世。本研究旨在解決這一問(wèn)題,填補國內空白。藥品生物制品檢定所。(2)臨床菌株:分離自天津醫科大學(xué)、材料與方法總醫院2000年5-7月門(mén)診及住院患者,包括大腸桿菌、肺(一)材料炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、陰溝腸桿菌等共9株。1.聚苯乙烯塑料板:12孔x8孔,孔容量0.4m。(二)方法中國煤化工藥敏試驗MC分界點(diǎn)2.抗生素:根據美國臨床實(shí)驗標準化委員會(huì )( NCCIS)抗生素最低抑菌濃度(MC)測定法規選擇12種抗生素其中表CNMHG每種6個(gè)稀釋度),原液氨芐霉素、頭孢唑啉、慶大霉素、丁胺卡那霉素、氧哌嗪青霉濃度為最高衣度的10借。既制后分裝,-20℃保存備用。在 Minibact鑒定系統配方基礎上并參照其他鑒定系素、妥布霉素購自衛生部藥品生物制品檢定所;頭孢噻吩、舒統進(jìn)行改進(jìn)。共包括ONPG、精氨酸、賴(lài)氨酸、鳥(niǎo)氨酸、苯丙氨作者單位:300203天津醫科大學(xué)檢驗系免疫教研室酸、H2S、靛基質(zhì)、尿素、伏普、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖、蜜二糖