楠竹葉乙醇提取液與水煮液的抑菌效果比較

囯際檢驗醫學(xué)雜志2012年1月第33卷第1期 Int J Lab Med, January2012,vol.33,No.145基礎實(shí)驗研究楠竹葉乙醇提取液與水煮液的抑菌效果比較梁瑩(威寧學(xué)院基礎醫學(xué)院病原系實(shí)驗室437100)摘要:目的比較楠竹葉無(wú)水乙醇提取液與楠竹葉水煮液的抑菌效果。方法采取瓊脂平板擴散法測定楠竹葉無(wú)水乙醇提取液與楠竹葉水煮液的抑菌效果及其最小抑菌濃度(MC)。結果無(wú)水♂醇提取液與水煮液對金黃色萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸杄菌、傷寒杄菌、普通變形杄菌、枯草芽孢杄菌均有明顯的抑菌效果,當提取液的濃度在100%和50%時(shí)的最小抑菌濃度分別為6.25%、12.5%、3.13%、6.25%、12.5%、25%和12.5%、12.5%、25%、12.5%、6.25%、50%。結論無(wú)水乙醇提取液的抑菌效果與濃度有密切關(guān)系,而水煮液兩種濃度的抑菌效與濃度影響不大。且提取液濃度在50%時(shí)與水煮液濃度在100%時(shí)的抑菌效果差距不大。因此,楠竹葉的水煮液對G和G菌的感染均有輔助療效的作用。關(guān)鍵詞:乙醇;楠竹葉;提取液;水煮液;抑菌效果OI:10.3969/j.issn.1673-4130.2012.01.019文獻標識碼:A文章編號:1673-4130(2012)01-0045-0The compare on the antibacterial effect of bamboo leaves ethanol extracts and bamboo leaves decoctionLiang ying( De partment of Medical microbiology of Basic Medical Xianning University, Hubei 437100, ChinaAbstract: Objective To compare on the antibacterial effect of bamboo leaves ethanol extracts and bamboo leaves decoction.Methods Agar plate diffusion method was used to determine ethanol extract of bamboo leaves and bamboo leaves and decoction antibacterial effect of the minimum inhibitory concentration. Results It showed that ethanol and decoction extract were significant antibacterial effect against Staphylococcus aureus Staph. epidermidis, Escherichia coli, Salmonella typhi, proteus vulgaris, Bacillus sub-tilis. the minimal inhibitory concentration of the extract for them were 6. 25%.12.5%.3. 13%.6 25%.12 5%, 25% and 12.5%12.5%.25%.12.5%,6. 25%,50% when the concentration of extract at 100% and 50%. Conclusion The experiment indicatesthat the antibacterial effect of bamboo leaves ethanol extracts is closely related to the concentration, and the antibacterial effect ofbamboo leaves decoction is little related to the concentration, and the antibacterial effect of extract concentration in 50% and decoc-tion concentration in 100% are not differ much. Therefore the decoction of bamboo leaves have secondary treatment effects forgram positive and negative bacteriaKey words: ethanol; bamboo leaves: extracts; decoction; antibacterial effect楠竹又名毛竹、貓頭竹、孟宗竹,屬禾本科竹亞科剛竹屬,術(shù)有限責任公司)普通肉湯培養基(由本室提供)。多年生綠植物,主要分布在湖南、湖北、江西、福建等地。楠竹1.1.↓供試菌金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、表皮葡萄球竹葉在食用、藥用方面都有著(zhù)悠久的歷史。竹葉含有大量的黃菌(ATCC12228)、大腸桿菌(ATCC25922)、傷寒桿菌(ATCC酮、內酯、多糖、葉綠素、氨基酸、維生素、微量元素等營(yíng)養素。14028)、普通變形桿菌(ATCC49132)、枯草芽孢桿菌(ATCC其中黃酮具有抗衰老、抗應激、抗疲勞、調節血脂、阻斷亞硝化9372),來(lái)源于華中科技大學(xué)同濟醫學(xué)院醫學(xué)微生物學(xué)教研室反應、增加免疫能力、抗菌和抑菌等作用3。據《中藥大辭典》1.1.5試劑石油醚(上海寶曼生物科技有限公司).無(wú)水乙記載,淡竹葉功用:主治清熱除煩,生津利尿;治熱病煩渴,小兒醇(安徽特酒總廠(chǎng)),0.9%的無(wú)菌生理鹽水(湖北拓朋藥業(yè)有限驚癇,咳逆吐血,面赤,小便短赤,口糜舌瘡等。近幾年來(lái),有關(guān)公司)人員對楠竹葉乙醇提取液的抑菌效果作了大量的研究,得到1.1.6陽(yáng)性藥物紙片青霉素( peillin G,PG)、鏈霉素( strep了廣泛的認識。但是,提煉提取液的操作過(guò)程繁瑣,而楠竹葉水 tomycin,Sm)、慶大霉素( gentamicin,Gim)、氯霉素( chloran-煮液既方便又省時(shí)更省力省費用?，F以楠竹葉無(wú)水乙醇提取液 phenicol,CM)均來(lái)自杭州天和微生物試劑有限公司。的抑菌效果與楠竹葉水煮液的抑菌效果進(jìn)行比較,報道如下1.2方法1材料與方法1.2.1供試菌懸液的制備營(yíng)養瓊脂斜面培養基24h新1.1材料鮮培養物,用無(wú)菌生理鹽水洗下,并稀釋至含菌量為5×10°1.1.1設備DHP9082D電熱恒溫培養箱(上海申賢恒溫設5×106CFU/mL(麥氏比濁法)的懸液,備用備廠(chǎng));全自動(dòng)不銹鋼雙層立式電熱蒸汽壓力消毒器(上海三申1.2.2楠竹葉提取液的制備6將楠竹葉烘干,粉碎,稱(chēng)取醫療器楲有限公司);垂直流超凈工作臺(上海智城分析儀器制10g竹葉于三角燒瓶中,加人100mL石油醚,常溫脫脂脫色2造有限公司);RE201C(2L)旋轉蒸發(fā)器(南京旺厚儀器設備有h,過(guò)濾回收石油醚,并將三角燒瓶中剩余的石油醚通過(guò)水浴加限公司);DK-600電熱恒溫水溫槽(上海申賢恒溫設備廠(chǎng));熱回收除盡。然后加100mL無(wú)水乙醇,放在60℃恒溫水浴TDI802B臺式離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng));電熱鼓風(fēng)干燥箱中提取16h,過(guò)濾,濾液4000r/min離心沉降10min,去除箱(上海申賢恒溫設備廠(chǎng))沉淀雜質(zhì)得到棕色的提取液。提取液用旋轉蒸發(fā)器進(jìn)行真空1.1.2楠竹葉采摘于咸寧學(xué)院校園小竹林的當年竹葉。濃縮,濃縮至10mL內,再加適量蒸餾水繼續濃縮除去溶劑至京脂(BR生化試京奧博星生物技經(jīng)高壓蒸汽滅國際檢驗醫學(xué)雜志2012年1月第33卷第1期 Int J Lab Med, January2012.vol.33,No.11.2.3楠竹葉水煮液的制備將新鮮楠竹葉50g洗凈涼表3楠竹葉水煮液的抑菌效果干,剪碎,加適量蒸溜水煎煮30min后倒出,再加適量的蒸溜抑菌圈直徑(mm)水繼續煎煮20min倒出,將兩次提取液合并,過(guò)濾,濃縮至50供試菌100%mL(100%)。經(jīng)高壓蒸汽滅菌,備用。1.2.4實(shí)驗紙片制備將備用的楠竹葉提取液和楠竹葉水煮金黃色葡萄球菌液作為原液,分別用2倍稀釋法稀釋成兩種不同的濃度表皮葡萄球菌100%、50%8,用新華定性濾紙制作成直徑5mm的濾紙片,大腸桿菌經(jīng)高壓蒸汽滅菌處理后,置120℃,2h烤干,用無(wú)菌鑷子夾取傷寒桿菌6.5浸在不同濃度的楠竹葉提取液和楠竹葉水煮液中12h,備用普通變形桿菌1.2.5陰性對照液紙片的制備將直徑5mm的無(wú)菌濾紙片放入0.9%的無(wú)菌生理鹽水中浸泡12h,備用?？莶菅挎邨U菌1.2.6瓊脂平板擴散法測定用涂抹法將各供試菌液(1001L)接種在培養基上,再用無(wú)菌鑷子夾取浸有不同濃度提取液表4陽(yáng)性、陰性對照組的抑菌效果和水煮液的濾紙片及陽(yáng)性和陰性對照紙片,分別貼于涂布供試抑菌圈直徑(mm)菌的瓊脂平板上。其中每個(gè)瓊脂平板貼3片,每種細菌對應每供試菌GmCM鹽水種液片重復3次。完成后,置于37℃的恒溫箱中培養24h,觀(guān)35察測定各瓊脂平板上濾紙片周?chē)志χ睆降拇笮?比較抑菌金黃色葡萄球菌效果表皮葡萄球菌1.2.7最小抑菌濃度(MIC)的測定用2倍稀釋法,將楠大腸桿菌2竹葉提取液與楠竹葉水煮液的原液(100%),用無(wú)菌蒸餾水稀傷寒桿菌釋為50%、25%、12.5%、6,25%、3.125%、1.56%6種不同濃普通變形桿菌度,分別取2mL放入無(wú)菌平板內,然后倒入高壓滅菌后的營(yíng)枯草芽孢桿菌3養瓊脂培養基2mL充分混勻,冷卻凝固后,每個(gè)平板加入0.2mL供試菌液涂勻。每個(gè)濃度重復3個(gè),以不放提取液和水煮:無(wú)抑菌效果液的平板作為對照完成后37℃培養24h觀(guān)察結果,以含提2.2最小抑菌濃度(MIC)測定結果見(jiàn)表5取液與水煮液濃度低,而無(wú)肉眼可見(jiàn)菌生長(cháng)的平板濃度為該菌表5提取液與水煮液最小抑菌濃度(MIC)的最小抑菌濃度(MIC最小抑菌濃度(MIC)1.2.8藥敏實(shí)驗紙片判斷標準見(jiàn)表1供試菌表1藥敏實(shí)驗紙片判斷標準提取液(%)水煮液(%抑菌圈直徑(mm)金黃色葡萄球菌抗菌藥物高度敏感中度敏感耐藥表皮葡萄球菌21~28≤20大腸桿菌3.1312~1傷寒桿菌6,2512.5013~14普通變形桿菌枯草芽孢桿菌25.002.1楠竹葉無(wú)水乙醇提取液與楠竹葉水煮液和陽(yáng)性、陰性礦3討論照組的抑菌效果新鮮竹葉乙醇提取液及水煮液的濃度在本研究顯示,100%的提取液對供試菌的抑菌效果均比較強。而提取液濃度在50%時(shí),供試菌的抑菌圈直徑落差較大,100%和50%時(shí)對供試菌都有明顯的抑制作用。其中對金黃特別是金黃色葡萄球菌由18.5mm下降到10.5mm,表皮葡色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等化膿性球菌的抑制能力最強,大萄球菌的抑菌圈直徑也由21.5mm降至12.0mm。說(shuō)明提取腸桿菌、傷寒桿菌、普通變形桿菌等腸道桿菌的抑菌效果次之,液的抑菌效果與濃度有密切的關(guān)系。但對大腸桿菌傷寒桿菌枯草芽孢桿菌的抑菌效果最弱。見(jiàn)表2~4影響不大。本研究顯示,楠竹葉的水煮液濃度在100%和濃度表2楠竹葉提取液的抑菌效果在50%時(shí),供試菌的抑菌圈直徑相近,說(shuō)明抑菌效果與濃度無(wú)抑菌圈直徑(mm)供試菌明顯差異,具體原因有待于進(jìn)一步研究100%50%賈桂云等0報道,竹葉的提取液適合添加到由細菌引起金黃色葡萄球菌510變質(zhì)的食物中。說(shuō)明竹葉的提取液在飲食過(guò)程中無(wú)毒無(wú)害表皮葡萄球菌而姚志蕊等叫的研究表明.楠竹葉提取物可應用于化妝品作大腸桿菌10為防腐劑,說(shuō)明對人體皮膚基本不會(huì )產(chǎn)生過(guò)敏反應。上述研究傷寒桿菌均表明,楠竹葉已經(jīng)廣泛用于工業(yè)、農業(yè)各個(gè)生產(chǎn)領(lǐng)域。根據普通變形桿菌藥物敏感實(shí)驗判定標準12,抑菌效果表明竹葉提取液及水煮枯草芽孢桿菌6.5液對G+和G菌均有一定的抑制作用.特別對化膿性球菌作更加明顯。因此,有待成為純天然的廣譜抗(下轉第4848國際檢驗醫學(xué)雜志2012年1月第33卷第1期 Int J Lab Med, January2012.vol.33,No.1(可能還有吸入)卵囊污染的水或食物而被感染。進(jìn)入人體后,[3]xaoL, Faver r, Ryan U,etal. Cryptosporidium taxonomy: recent卵囊內的子孢子逸出并寄生于胃腸道或其他組織(如呼吸道)advances and implications for public health [J]. Clin Microbiol上皮細胞,經(jīng)裂體增殖及配子增殖發(fā)育為卵囊。卵囊在宿主體ev,2004,17(1):72-97內形成孢子排出。卵囊有兩種,一種是通常從宿主排泄的厚壁[4葉應嫵,王敏三,申子瑜,全國臨床檢驗操作規程[M.3版,南京卵囊,一種是與自體感染有關(guān)的薄壁卵囊6。隱孢子蟲(chóng)的生活東南大學(xué)出版社,2006:308史僅需5~11d即可完成。由于卵囊排出體外時(shí)已具有感染[5] Pantenburg B, Dann SM, Wang HC. Intestinal immune responseo human Cryptosporidium sp. Infection[J]. Infect Immun. 2008性,使直接和即刻的糞-口傳播成為可能。76(1):23-29隱孢子蟲(chóng)感染是引起艾滋病患者腹瀉的最常見(jiàn)原因。嚴[6]趙杰,張龍現,李逐波,隱孢子蟲(chóng)病研究進(jìn)展[J].河南畜牧獸醫重的腹瀉多發(fā)生于CD4細胞顯著(zhù)減少(<200/L)的艾滋病2008,29(5):8-9患者,感染起始于空、回腸,可播散至大部分的胃腸道黏膜。[7]吳亮,陳盛霞,曹建平,等.隱孢子蟲(chóng)病的流行與診斷研究進(jìn)展臨床特征為頻繁水瀉,一天有數次至數十次,患者可出現嚴重J].國際醫學(xué)寄生蟲(chóng)病雜志,2006,33(5):277-281脫水和電解質(zhì)紊亂,一些患者可進(jìn)展為慢性腹瀉。人對隱孢子[8]張艷梅,潘自鐵,高永剛.人類(lèi)免疫缺陷病毒感染者及艾滋病患者蟲(chóng)的易感性與年齡顯著(zhù)相關(guān),5歲以下嬰幼兒易感染,先天及免疫功能與病毒載量之間的關(guān)系[J.國際檢驗醫學(xué)雜志,2008,后天免疫功能低下者及接受免疫抑制劑治療的患者感染率高29(6):563-564也可發(fā)生嚴重的隱孢子蟲(chóng)感染12。由藥物造成免疫功能低[9王琚,劉泉波,許紅梅.兒童遷延性慢性腹瀉的病因分析[J,國際下的患者,停藥后隱孢子蟲(chóng)病即可痊愈。檢驗醫學(xué)雜志,2011,32(2):236-238目前,診斷隱孢子蟲(chóng)病的方法有多種,如病原學(xué)檢查法、免[10] Ford A, Duke T, Campbell H. Evidence behind the WHO guide疫學(xué)方法和核酸分子生物學(xué)方法131。免疫熒光法及PCR方lines: hospital care for children what is the aetiology and treament of chronic diarrhoea in children with HIV[J]. J Trop P法在國內外都已有所應用,但由于其成本較高及標準化等原因,不易于普及。病原學(xué)檢查目前仍是隱孢子蟲(chóng)病確診的11 Sandhu sK. Priest JW. ammie P,a. The natural histroy金標準。病原學(xué)診斷方法包括碘染色、沙黃-美藍染色、金胺antibody response to Cryptosporidium parasites in men at high酚染色、改良抗酸染色等,從糞便中檢查隱孢子蟲(chóng)卵囊1。其risk of HIV infection[J]. Infec Dis, 2006, 194(10):1128-1437中,改良抗酸染色是臨床實(shí)驗室最常使用的可靠方法,抗酸染「12] Udgiri n,MnzM, Kashyap r,etal. Intestinal cryptosporidiosis in色鏡下卵囊呈亮紅色,圓形或橢圓形,直徑4~5gm,內部子孢living related renal transplant recipients [J]. Transplant Proc子清晰可見(jiàn)。為提高卵囊的檢出率,涂片染色前應先濃集卵囊,甲醛-乙酸乙酯沉淀法是推薦使用的臨床實(shí)驗室糞便濃集13]田利光,周曉農.艾滋病患者幾種易被忽視的腸道寄生蟲(chóng)感染方法].中國寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志,2008,26(5):376-38[14]陳盛霞,吳亮,沈玉娟,等.采用實(shí)時(shí)PCR技術(shù)比較不同方法提純參考文獻隱孢子蟲(chóng)卵囊DNA效果[].中國寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志2009,27(2):130-134[1] Certad G Arenas-Pinte A Pocaterra L, et al. Cryptosporidiosis[15]盧良安,張文生,李碧波.隱孢子蟲(chóng)病的病原學(xué)診斷及病例對照研HIV-infected venezuelan adults is strongly associated with acute究[冂.當代醫學(xué),2009,15(13):150-151or chronic diarrhea[J]. Am J Trop Med Hyg, 2005,73(1):54-57[2]杜學(xué)利,免疫缺陷病人隱孢子蟲(chóng)感染流行病學(xué)特征研究進(jìn)展[J](收稿日期:2011-09-20)中國病原生物學(xué)雜志,2010,5(9):699-702(上接第46頁(yè))「5]譚瑤,趙清.KB紙片擴散法藥敏試驗[J].檢驗醫學(xué)與臨床菌藥物的可靠來(lái)源2010,7(20):2290-2291本研究顯示,楠竹葉提取液濃度在50%時(shí)與水煮液濃度6]黃占旺,鄒雙雙,熊水波,等.毛竹葉提取物抑菌作用的初步研究在100%時(shí)的抑菌效果差距不大,而水煮液濃度在100%和[J].江西農業(yè)大學(xué)學(xué)報,2005,27(6):961.50%時(shí)的抑菌效果均比較穩定。因此,提取液的抑菌效果還是[7]陳奇中藥藥理實(shí)驗M貴陽(yáng):貴州人民出版社,199:81比相同稀釋度水煮液的抑菌效果要好。但是考慮到中國人口[8]蕭力爭,郭維,劉素純,等茶葉提取物與二氫楊梅素抑菌活性比較研究[J.安徽農業(yè)大學(xué)學(xué)報,2008,35(2):239-242眾多,特別是偏僻山區,醫源條件不齊,同時(shí),水煮液比提取液9]李桂蘭,芮成,3種杏香兔耳提取物抑菌活性的研究[.中國醫藥制作更加方便、經(jīng)濟,需要的儀器條件更為簡(jiǎn)單,因此對于一些指南,2010,8(7):45-47常見(jiàn)的皮膚化膿性感染的日常家庭治療,水煮液更為方便實(shí)[10賈桂云,鄒潤英,郭飛燕,等,竹葉提取物抑菌效果研究[].海南用。輔以飲用、外用、預防、保健都具有良好的抑制細菌生長(cháng)的師范大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2010,23(4);420-422作用311[1]姚志蕊,曹光群,楊成,等.毛竹葉抑菌活性成分提取工藝研究J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2008,28(5):51-54參考文獻[12]姚旌旗,覃金紅,孫劍剛,等.病原學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗教程[M].北[1]陶文亮,吳玉娟.竹葉黃酮提取分析方法的研究及其新進(jìn)展[J]京:科學(xué)出版社,2007:67-68貴州化工,2009,34(3):15-17[13]陽(yáng)東青,趙美麗,余德潤,等.從竹葉中提取葉綠素[].江西化工[2]張英.竹葉黃酮的生理和藥理活性[J].世界竹藤通訊,20042008(1):33-35[14]孫長(cháng)花,張素華,張凌云,等,竹葉黃酮的生理活性與應用研究[3]荊文靜竹葉黃酮類(lèi)化合物研究進(jìn)展[J].科技情報開(kāi)發(fā)與經(jīng)濟,.四川食品與發(fā)酵,2006(1):13-162009,19(20):139.[4]衛生部衛生法制與監督司.消毒技術(shù)規范[S].2002-11-15.(收稿日期:2011-07-09)