環(huán)肽合成研究

2010年第23 期SCENCE & TECHNOLOGY NFORMATION?？平糖把豲科技信息環(huán)肽合成研究孔凡琳'王印2(1.徐州醫藥高等職業(yè)學(xué)校江蘇徐州221116;2.徐州生物工程高等職業(yè)學(xué)校 江蘇徐州221006)[摘要]環(huán)肽由于其穩定的結構特性在生物模擬,藥物設計,納米與分子器件,生物傳感器以及催化劑等方面起著(zhù)越來(lái)越重要的作用,本文介紹了近年來(lái)環(huán)肽化合物的合成及其應用的一些進(jìn)展。[關(guān)鍵詞]環(huán)肚合咸;策略;固相多肽合咸;液相多肽合威;化合物庫Research on Design and Synthests of CyelicPeptides[Abstract]Cyclic peptides are playing more important role in biological modeling , pharmaceutical design ，nano- and moleculardevices , biological sensors and catalysts because of their stable structural characteristics . the design , ynthesis and applications of cyelicpeptide compounds were discussed in this aricle.[Key words]Cyclic peptides; Synthetic strategy ; Solid-phase peptide synthesis ; liquid-phase peptide eynthesis ; Compounds library0引言.3 實(shí)驗步驟.20世紀80年代由于Merifed固相合成方法的改進(jìn),促進(jìn)了半1.3.1 CC-10-C1線(xiàn)性肽的耦聯(lián)自動(dòng)，全自動(dòng)多肽合成儀的發(fā)腿,使得肽和蛋白質(zhì)的合成技術(shù)達到了一1)取 2.0mmol氯甲基樹(shù)脂,置于玻璃反應柱中,加Sml DMF,溶個(gè)高峰。到日前為止,人們已實(shí)現Y由高達數百個(gè)氨基酸(或以上)組脹15分鐘.抽干。2)反應柱中連續兩次加入新配制的20%DBLK溶液，進(jìn)行去保成的線(xiàn)狀多肽的合成”,并月有著(zhù)相當高的收率。隨著(zhù)對越來(lái)越多的生護,第-次5分鐘,第二次7分鐘。脫去樹(shù)脂上的Fmoe保護基,然后用命現象及蛋白質(zhì)功能認識的深入，以及對藥物設計的前導化合物和各DMF和DCM洗滌7-8逾至反應柱中無(wú)游離Fmoe及DBLK溶液,抽種功能材料需求的擴大,人們更加關(guān)注具有特殊形狀和特殊性質(zhì)的多肽如環(huán)肽,變晶肽,肽庫等。新的復雜的多肽化合物中,環(huán)肽無(wú)論從何種意義上講都可以說(shuō)是3)稱(chēng)取2.973g Fmoc -Gly-OH(甘氨酸)置于柱中,用DMF溶解,同最重要的一種。其特殊的結構以及對酶降解的穩定性使得它的成用范時(shí)用氮氣攪拌,然后加入DIPCDI 9.7ml,反應2個(gè)小時(shí)。圍超出所有人的預料.特別是使用一些特殊的方法得到某種指定結構4)用玻璃棒取少許用于茚三酮檢瀏.肽樹(shù)脂完全透明。的環(huán)肽時(shí),人們甚至發(fā)現它在藥物,納米材料,生物離子通道及超分子的偶聯(lián)。5)用DMF洗4遍,把未反應的氨基酸沖洗干凈,便于以后氨基酸自組裝等領(lǐng)城有著(zhù)極其泛的用途"。但環(huán)肽復雜的結構使得有機化6)加入20%DBLK,同時(shí)氮氣攪拌,第- -次5分鐘,第二次7分鐘,學(xué)家合成環(huán)肽仍然需要運用熟練的技巧并花費大載的時(shí)間--即使是以脫去Fmoc保護基。中等尺寸的環(huán)肽，要使收率達到50%以上并且純度超過(guò)97%.依舊是7)取少許樹(shù)脂用于茚三酮檢測,肽樹(shù)脂為藍黑色。一件挑戰性的工作。8)稱(chēng)取1.492g Fmoe- Met- 0H(蛋氨酸)置于反應柱,用DMF溶解,1本文將 以活潑脂法為例進(jìn)行討論同時(shí)用氮氣攪拌,然后加入9.7ml的DIPCDI。9)重復以上步驟至所有的氨芎酸偶聯(lián)完全為止。1.1 活潑酯怯基本原理活潑酯法中活化羧基和環(huán)合反應是分兩步進(jìn)行的?；畎l(fā)酯相對很13.2 CC-10- C1全保護肽的裂解1)把以上反 應好的粗肽置于250ml 的圃底燒瓶中并放入-個(gè)攪穩定,一般不需要純化可直接用于環(huán)合反應。幾乎所有可用于偶聯(lián)反摔應的活潑酯都可用于合成環(huán)肽叫,主要有對硝基酚觜.N-羥基琥珀酰2)配裂解液:三氟乙醇(TFE):二氯甲烷(CH2CL2)= 95:2.5:2.5亞胺酯、五氟苯酯和2.4.5-三氟苯酚酯。3)將裂解液倒人圓底燒瓶中,并將圓底燒瓶置于磁力攪拌器上，線(xiàn)性多腦的c嘴羧花與對硝基融N-陘蒸驄珀酰亞胺五氟苯酚打開(kāi)電源開(kāi)關(guān),并緩慢調節調速按鈕 至合適的速度。攪拌2個(gè)小時(shí)?；?4.5-.三氨苯酚,在DCC或其他縮合劑存在下.于低溫反應,很容易4)將裂解液過(guò)濾到2L的廣口瓶中,并加入1.5L冰凍乙醚,沉降.得到相應的活潑酯。這種N端通常帶有BOC或Z保護的活潑酯在酸半個(gè)小時(shí),倒掉上清液, 將沉淀均分在四個(gè)離心管中，于離心機中離性條件下脫去保護基,形成活潑酯的氨鹵酸鹽在弱堿性稀溶液中,如心,轉速 30/分鐘，時(shí)間3分鐘。然后再洗康一遍。在吡啶,DMF或二氧六環(huán)- -類(lèi)介電常數較大的溶劑中，保持pH8~9,5)將離心管用錫紙封口,并在錫紙上打幾個(gè)孔,便于通氣。然后放加熱(60~100C)或室溫攪拌數小時(shí)至數日,最終叮得到環(huán)肽。于真空泵中抽干。1.2實(shí)驗內容6)取出稱(chēng)重,得粗晶2.302g。GG-10-C1的環(huán)化(肽序 H-Iy)-M-y-oV-hr-Hi- . 133 GC 10-C1線(xiàn)性肽的首尾環(huán)化Cy-Asn -Gly -OH)1)稱(chēng)取500mg CG-10- C1線(xiàn)性肽.置于500ml的四底燒瓶中,并12.1實(shí)驗器材敢入一個(gè)攪拌子,加DCM250ml ,用于溶解線(xiàn)性肽。并保證濃度控制在玻璃反應柱,圓底燒瓶,移液槍,移液管,干燥臂,電子天平,磁力2m/ml.攪拌器,離心機(帶離心管)2)將圓底燒瓶置于磁力攪拌器上固定,打開(kāi)電源開(kāi)關(guān),調節轉速,1.2.2原料及試劑氯甲基樹(shù)脂(產(chǎn)地:上海吉爾),Fmoe -Gly- -OH(甘氨酸,產(chǎn)地:蘇州不斷攪拌。3)待線(xiàn)性肽溶解完全，以PyBOP/HoBt/DIPEA體系進(jìn)行偶聯(lián)。稱(chēng)天),oe-e-0H(蛋趙酸,產(chǎn)地:成都凱奏)，Fmoe-Cy-OH(半胱 取 PyBOP 1388 ,HoBt 36mg，同時(shí)加人圓底燒瓶，再加DIPEA 0.Smal。氨酸,產(chǎn)地:蘇州天馬),Fmoc-Va1-0H(纈氨酸,產(chǎn)地:上海吉爾),并補充DCM 200ml。Fmoc -Thr -0H(蘇氨酸，產(chǎn)地:蘇州天馬)，Fmoc-His _OH(組氨酸,產(chǎn)4)在常過(guò)下攬拌18個(gè)小時(shí).鋪板.點(diǎn)樣。地:蘇州天馬),Fmoe-Asn-0H(天冬氨酸,產(chǎn)地:蘇州天馬) ,PyBOP(六中國煤化工!據反應情況適當調節真氟磷酸苯井三唑-1-基~氧基三吡咯烷基磷產(chǎn)地: 上海吉爾), HoBt空度(1-羥基苯并三唑,產(chǎn)地:蘇州天馬)、DMF(N、N-二甲基甲酰膠,產(chǎn)地:6)HC N M H GATS:EDT:H20= 94;蘇州天馬).DCM(二氧甲烷,產(chǎn)地:蘇州天馬)、DBLK(20%六氫吡啶+ 2:2:2)DMF). DIPCDI(N,N-二鼻丙基碳二亞胺,產(chǎn)地:蘇州天馬)等。DIPEA將裂解液倒人圓底燒瓶,并在燒瓶中放一個(gè)攪摔子。將圓底燒瓶(N.N-乙基二異丙腰,產(chǎn)地。西安美聯(lián)),TA(三氟乙酸),TIS(三乙丙置于磁力攪拌器上，攪拌兩個(gè)小時(shí) ,取下,用乙酷沉降,離心,得粗腦?；柰?,EDT(1,2-乙二硫醇),ITFE(三氟乙醇).科技信息?？平糖把豲SCTENCE & TECHNOLOGY NFORMATION2010年第23 期2實(shí)驗結果2.3 CG -10-C1環(huán)肽取樣迭MS分析結果(圖4)。2.1 GC-10-C1 環(huán)化18小時(shí)后點(diǎn)樣圖(如圖1)。山晨開(kāi)制:熏仿;甲醇:醋酸=90;8:2A為線(xiàn)性肽B為環(huán)肚12.2 HPLC 圖譜分析3結果分析2.2.1 HPLC 制備前的圖譜分析(圖2)。3.1根據點(diǎn)樣(圖 1)可以看出經(jīng)過(guò)18小時(shí)的環(huán)化反應，有新的物質(zhì)生成。3.2 通過(guò)質(zhì)譜分析(圖4),主峰的分子最為1035.0,正是所需要的目的峰。說(shuō)明所生成的新物質(zhì)為所需要的不腦。3.3 利用活發(fā)脂法合 成環(huán)肽可取得很好的效果，而且粗肽不需要純化可直接用于環(huán)肽合成，使環(huán)肽的合成簡(jiǎn)單化,不僅可以降低生產(chǎn)成本,而且還能增加環(huán)肽的收率。C(鄉考文獻]圈2[1 ]Merifeld,Enickon Solid Phase Peptide Syntheis.2.2.2 HPLC制備后的圖譜分析(圖3)。[2]陶慰孫,李惟,姜需明，等,蛋白質(zhì)分子基礎.第三版[M].北京:高等教存出版社，1995:133-147.[3]黃惟德,陳常慶.多肽合成科學(xué)出版社.1985.[4]方宏遭多肽類(lèi)藥物制劑研究現狀.北京:軍事醫學(xué)科學(xué)院生物[4]萬(wàn)宏清.多肽類(lèi)工程研究所.0007.[5 ]Shid.R.,Neuben.K. Im. J. Pepl Prolein Res. 191.37.502.[6]Famer, CG.A.Audlya.T.Deyle.D.jen.F.Coldstein,G. lot. ]Pep. Protein Ras. 1991:37,198.作者簡(jiǎn)介;孔凡#(1980- -),男,江蘇徐州人,教師,本科,專(zhuān)業(yè)方向為臨床藥學(xué)。[責任編輯:常鵬飛]團3●(上接第94頁(yè))逐層發(fā)現的方法。選取運行本程序所在主機的網(wǎng)關(guān)地戶(hù)清晰地 顯示出來(lái),并且提供方便的圈形化界面?；贐/S架構的設址作為初始節點(diǎn)。通過(guò)SNMP協(xié)議進(jìn)行拓撲發(fā)現。遍歷路由表,得到的計為網(wǎng)絡(luò )管理人員提供更有分布性和實(shí)時(shí)性,操作更方便、能力更強網(wǎng)絡(luò )層節點(diǎn)信息后保存于網(wǎng)絡(luò )層節點(diǎn)數據表中。通過(guò)分析路由表獲得的網(wǎng)絡(luò )拓撲管理工具與初始節點(diǎn)所在網(wǎng)絡(luò )直連的其他網(wǎng)絡(luò )地址.對其網(wǎng)絡(luò )進(jìn)行網(wǎng)關(guān)地址的Ping操作，得到部分活動(dòng)節點(diǎn)，再通過(guò)對這些活動(dòng)節點(diǎn)的ARP表獲[參考文獻]取,補充完善活動(dòng)節點(diǎn)數據表。對表中的活動(dòng)節點(diǎn)進(jìn)行SNMP探鍘,獲[1]於成才.善于 Jmx和J2EE的網(wǎng)絡(luò )管理系統.計算機技術(shù)與發(fā)展，2006,12.可護取其FDB信息.并將其相連節點(diǎn)保存于鏈路層節點(diǎn)數據表中。通過(guò)對[2]林曼筠.可擴 展的計算機網(wǎng)絡(luò )管理系統技術(shù)研充.中國科學(xué)院研究生院.002.鏈路層節點(diǎn)關(guān)系的判斷,推測出物理層節點(diǎn)的存在,將其結果保存于[3 ]劉態(tài)，中國煤化工瓶撲發(fā)現與分析力法D物理層連接數據表中。至此完成對網(wǎng)絡(luò )拓撲發(fā)現。計算機應[4]李子嘎叩計算機工程.2006();3結束語(yǔ)104-106.YHCNMHG本系統有完善的拓撲發(fā)現及描繪功能。能保證收集到的網(wǎng)絡(luò )拓撲[責任編輯:湯靜]信息的準確性和完備性.可以將網(wǎng)絡(luò )拓撲信息組織和存儲起來(lái)并向用63