澤瀉乙醇提取物的HPCE分離研究

第24卷第1期分析試驗室ol.24.No.12005年1月Chinese Journal of Analysis Laboratory澤瀉乙醇提取物的HPCE分離研究馬少妹*1王巧娥2李琦2沈陽(yáng)2王小如21廣西民族學(xué)院化學(xué)化工系,南寧5300062.廈門(mén)大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院現代分析科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗室,廈門(mén)361005)摘要采用高效毛細管電泳的膠束電動(dòng)毛細管色譜的分離模式MEKC)對澤瀉的乙釀σ5%湜取物進(jìn)行分離研究。以十二烷基硫酸鈉(SDS)膠束為準固定相翮砂為緩沖體系甲醇為有機添加劑考察了Ss濃度、硼砂濃度、pH、甲醇用量、電泳電壓、電泳溫度等對分離的影響。結果表明:硼砂緩沖體系為運行緩沖溶液(p9.18~9.20)硼砂濃度30 mmol/I sdS濃度45mmol/I甲醇體積分數30%分離電壓25kV分離溫度25℃時(shí)分離效果最好。在此條件下得到分離度和重現性均較好的澤瀉乙醇提取物的HCE色譜圖。關(guān)鍵詞澤瀉膠束電動(dòng)毛細管色譜汾離中圖分類(lèi)號x657.8文獻標識碼∶文章編號:000070(2005)1-0006003澤瀉是一味常用中藥有利水濕、化痰飲、降火械廠(chǎng))澤瀉藥材采于福建建甌經(jīng)鑒定為澤瀉科氣、去濕熱、補陰益氣等功效1歷經(jīng)300多年至澤瀉屬植物 Alisma orientalis(Sam.) Juzep.十二烷今仍具有誘人的開(kāi)發(fā)前景,為世界醫藥學(xué)所關(guān)注?；蛩徕c(色譜純 Sigma公司),NaH2PO4NaOH、目前澤瀉主要以23-乙酰澤瀉醇B為質(zhì)控指標采硼砂無(wú)水乙醇均為分析純。23-乙酰澤瀉醇B、24-用薄層掃描泫LCλ高效液相色譜汯HC對其乙酰澤瀉醇A〔南京中醫藥大茡植物藥深加工工質(zhì)量進(jìn)行評價(jià)23程研究中心高效毛細管電泳HPCE)前正廣泛應用于中1.2實(shí)驗方法草藥指紋圖譜的研究45]本文采用高效毛細管1.2.1分析液制備將澤瀉的干燥埉根粉粹過(guò)電泳的膠束電動(dòng)毛細管色譜的分離模式對澤瀉的250{m篩混合均勻后準確稱(chēng)取5.0g,置于50乙釀嚦5%湜取物進(jìn)行的分離研究得到了分離度mL磨口瓶錐形中加25mL%5%乙醇超聲提取2和重現性均較好的澤瀉藥材的HE色譜圖譜,為次每次30mi。提取液合并離心分離取上清液建立澤瀉藥材HPCE指紋圖譜庫提供實(shí)驗方法和為分析液。依據從而為全面評價(jià)澤瀉藥材的質(zhì)量提供參考。1.2.2HPCE分離按要求配制實(shí)驗用操作緩沖1實(shí)驗部分液運行前超聲脫氣15mi。毛細管柱使用前依次1.1儀器與試劑用0.1mol/ L Naoh和水及緩沖液沖洗5min然后HP3DCE型高效毛細管電泳儀(美國惠普公在運行電壓下平衡30min。以后每次進(jìn)樣依次用司)石英毛細管(60-m×75;mⅩ河北永年光纖乙醇、水、0.1 mol/L NaOH溶液和水及緩沖液沖洗廠(chǎng))828型pH測試儀美國Oron公司)SK320H3min進(jìn)樣前在運行電壓下平衡5min本實(shí)驗采超聲波清洗器(上?？茖С晝x器有限公司),M-用壓力進(jìn)樣(250kPa),二極管陣列DAD)檢測器CRO2R臺式冷凍離心機 Hettich)MlQ超純水裝檢中國煤化工置JD-06A型高速中藥粉碎機溫嶺市大海藥材器CNMHG*收稿日期200308-17修訂日期200404-19作者簡(jiǎn)介馮少妹(1964-),女,工程師第24卷第1期分析試驗室ol.24.No.1Chinese Journal of Analysis Laboratory2005-12結果與討論pH大于10,遷移時(shí)間延長(cháng),分離效果也不好。為2.1提取溶劑的選擇確定最佳的硼砂溶液濃度、pH和Ss濃度以色譜據文獻報道61澤瀉的主要藥效成分為三萜醇優(yōu)化函數-COμ7(其值取決于所有峰的分離度)酮類(lèi)化合物易溶于醇類(lèi)等有機溶劑。制備分析液作為評價(jià)指標分離度小于1作為0處理峰高表時(shí)分別采用無(wú)水乙醇、95%乙醇、無(wú)水甲醇、95%示響應值的大小)在檢測波長(cháng)202mm分離電壓甲醇、乙腈、95%乙腈等溶劑進(jìn)行提取結果表明以25kⅤ工作溫度25℃,甲醇體積分數為30%的條95%乙醇、95%甲醇提取效果為佳?？紤]到甲醇的件下進(jìn)行了三因素三水平正交試驗方案L34毒性最后選用95%乙醇為提取劑。正交實(shí)驗的因素、水平以及結果見(jiàn)表1和表2。2.2毛細管電泳分離條件的選擇根據正交試驗結果(表1)通過(guò)方差分析和顯2.2.1毛細管電泳模式的選擇澤瀉乙醇提取物著(zhù)性檢驗得岀洇素A即SS濃度對分離效果影大部分是難溶于水的中性分子故選用MEKC非響最顯著(zhù)因素C即硼砂濃度次之因素B即pH水毛細管電泳模式分別進(jìn)行試驗結果表明MKC最小表2)在此基礎上進(jìn)行了擴展試驗最終得的分離度優(yōu)于非水毛細管電泳出分離澤瀉乙醇提取物的最佳HCE條件為:DS222緩沖試劑的選擇毛細管的電滲流(EOF)濃度為45mmo/L,硼砂濃度30mmol/LplH9.20是MEKC技術(shù)的基礎。由于實(shí)驗過(guò)程選擇表面活甲醇體積分數30%分離電壓25kV、分離溫度25性劑SDs為準固定相,因此只有在中性或堿性條℃件下才能確保膠束最終從負極經(jīng)過(guò)檢測器一端)2.3重復性試驗流出。如果p過(guò)小膠束向正極運動(dòng)的速度大于在最佳緩沖體系和電泳條件下對同一樣品進(jìn)EO速度而無(wú)法分離如果pH過(guò)大EOF增大,可行1天內連續3次和連續2天檢測得到遷移時(shí)間能會(huì )使樣品中的組分未完全分離就被洗脫出系統。的日內和日間相對標準偏差(RSD)分別為0.31%據此選擇了磷酸鹽和硼砂緩沖體系進(jìn)行試驗結和0.43%;峰面積的日內和日間相對標準偏差果表明弸砂緩沖體系優(yōu)于磷酸鹽緩沖體系。RSD玢別為0.65%~0.72%和0.97%~1.04%2.2.3甲醇用量在本實(shí)驗中,甲醇的主要作用各峰面積與樣品濃度成正比。通過(guò)內標法對23-乙是增溶。實(shí)驗發(fā)現甲醇的體積分數小于10%時(shí),酰澤瀉醇B24-乙酰澤瀉醇A進(jìn)行定性從圖1可分離效果不好,且毛細管容易堵塞而甲醇的體積分數大于40%時(shí)分離效果也不好這可能是甲醇表1正交試驗方案與結果量過(guò)多影響膠束的形成從而影響分離效果。甲Tab 1 Arrangement and results of orthogonal experiment醇的體積分數為30%時(shí),可獲得滿(mǎn)意的分離因素A因素B素C實(shí)驗2.2.4電泳電壓的選擇采用了17、20、23、25、SDS濃度硼砂濃度電滲流序號28、30kV不同的分離電壓進(jìn)行實(shí)驗結果發(fā)現隨cA mmol/L) phcA mmol/L) COF著(zhù)電壓的增大分離時(shí)間縮短但電壓越高分離度〔1)8.1)151)3(1)9.(2)252)越低。綜合考慮選擇25kV為分離電壓。30(1)9.53)353)38.002.2.5電泳溫度的選擇實(shí)驗觀(guān)察了分離溫度為32)8.1)220、23、25、28、30℃時(shí)的遷移時(shí)間和分離效果。結果發(fā)現溫度對遷移時(shí)間和分離效果的影響均不明顯。所以選擇接近室溫的25℃。456783(2)9.02)33)32)9.53)11)41.924(3)8.31)353)572.2.6硼砂溶液濃度、p和SDs濃度的選擇根40(3)9.02)151)61.99)252)64.01據初步的實(shí)驗結果硼砂溶液濃度、pH、SDS濃度對中國煤化工HPCE分離影響顯著(zhù)。當SDS濃度小于35mmol/LCNMHG時(shí)23-乙酰澤瀉醇B和24乙酰澤瀉A不分離。K3/3mmo/L時(shí)遷移時(shí)間延長(cháng)分離效果也不好。同樣最佳組合0.149.221.91SDS濃度大于50mmo/L時(shí)或硼砂濃度大于A(yíng), B,Co第24卷第1期分析試驗室ol.24.No.12005年1月Chinese Journal of Analysis Laboratory表2方差分析表Tab 2 Variance analysis方差來(lái)源平方和自由度均方差顯著(zhù)性B153.51218.08109.0441.94誤差)5K總和)990.4FF0.o22)=99Fo(22)=19tionalities, Nanning 530006), WANG Qiao-e, LI QiSHEN Yang and WANG Xiao-ru( The key Laboratory ofytical Science of MOE361005), Fenxi Shivanshi,2005,241):8~10Abstract: The separation of the compounds extractedfrom rhizoma of Alisma orientalis( Sam.)vep usIn95% ethanol by micellar electrokinetic capillary chro-matography MKCC ) with sodium dodecyl sulphate( SDS )as the micellar phase, borax as a buffer and圖1澤瀉藥材的毛細管電泳譜圖methanol as an organic additive was studied which esFig. 1 Electrophorograms of alisma orientalis1-24-乙酰澤瀉醇A;2-23-乙酰澤瀉醇Btablished a fingerprint technique for the rhizoma of Alisma orientalis. The effects of sds micellar and borax看出24乙酰澤瀉醇A較23-乙酰澤瀉醇B先洗脫 concentration, pH buffer; methanol volume fraction,p出來(lái)。plied voltage and temperature on the separation were in-vestigated by the orthogonal test using chromatography參考文獻optimization function( COF )as the evaluation index. It[1]中華人民共和國藥典[M]北京:化學(xué)工業(yè)出版社, was found that the optimalseparation conditions of thesecomponents might be achieved by using a fused silica[2]彭國平潘林梅文紅梅.南京中醫藥大學(xué)學(xué)報自然 capillary with60 cm long and75;mm, in which30科學(xué)版)2001,K3):154mmol/L borax buffer solution( pH 9. 20 containing 45[3]文紅梅李偉彭國平.中藥材1998212)595mmoVL SDS and 30% methanol was filled under the[4]謝培山.世界科學(xué)技術(shù)一中藥現代化2001x3)8voltage of 25 kV and a temperature of 25C. HPCE fin[5]王天松.中成藥20002x6)397[6]龔樹(shù)生張建軍曹廣智等.山西中醫學(xué)院學(xué)報,agerprint of the rhizome of Alisma orientalis with perfect2000K(1)28;b.K(2)22separating size and repeatability couldpected[7]吳惠芳關(guān)福玉羅毅.分析化學(xué)19962410)117Thus the method provides a basic information for thewhole quantity control of the rhizoma of Alisma orientalisSeparation of ethanol extract of Rhizoma of Al- in the productsisma Orientalis by High Performance Capillary elec中國煤化工: Micellar electroktrophoresis( HPCE MA Shao-mei( Department ofCNMH GationGuangxI