甲氧基聚乙二醇吡硫醇制備條件的優(yōu)化研究

中南藥學(xué)2011年8月第9卷第8期Central South Pharmacy. August 2011, Vol.9 No.8炎性細胞因子，實(shí)驗證實(shí)I-10可抑制I-1、L-6. II-8 、TNF-a及自身的合成心。降低黏附分子表達，對組織器官的參考文獻損傷起著(zhù)保護作用。TNF-a 是炎性反應過(guò)程中出現最早、最[1] Kaminska J, Kowalska M，Kotowicz B, et al . Pretreatment重要的炎性介質(zhì)，能激活中性粒細胞和淋巴細胞，促使細胞serum levels of cytokines and cytokine receptors in patients with因子的合成和釋放，其升高程度與疾病嚴重程度相關(guān)"。nonr small-ell lung cancer, and correlations with clinic opatho-國內學(xué)者研究發(fā)現某些中藥具有明確的改善急性肺損logical features and prognosis, M CSF-an independent prognos-傷，抗多器官功能障礙綜合癥(MODS)的作用，參麥注射tic factor [J]. Oncology, 2006, 70 (2) 115-125.液是其中較常用的藥物7日]。作用機制與其顯著(zhù)抑制TNF-[2] 楊陽(yáng)，毛黎明.參友配伍川芩嗪注射液對心肌缺血再濮注損傷的臨床療效觀(guān)察U].中華實(shí)用中西醫雜志，2004, 4 (17) ;a,堿少細胞因子的釋放，抑制炎癥反應有關(guān)。2919- 2920.參麥注射液是在古方參麥散的基礎上.運用現代科學(xué)技術(shù)3] 李建生。趙君玫.郭勝典，等川芎嗪和參麥注射液對腦缺血改型的中藥靜脈注射液，由人參、麥冬2味藥物提取精制而再灌注肺臟損傷的保護作用U]. 河南中醫藥學(xué)刊，2003. 18成。具有補元氣、益氣固脫、養陰生津之功效，可增強單核(2): 17-19. .巨噬細胞系統功能及非特異性抗感染作用，并能抑制炎性介[4] NgCS, Wan s, Hui CW. et al. Video ssisted thoracie sur-質(zhì)的過(guò)度釋放，有效調控IL-6、Il-10、 TNF-a等炎性細胞gery for early stage lung cancer can short-termn immunological因子的產(chǎn)生，改善微循環(huán)和組織灌注，減輕肺損傷}20)。advantages improve long term survival? U] Ann Thorac Card-本研究表明，肺癌根治術(shù)后4h2組血漿TNF-a、IL-6、iovasc Surg, 2006, 12 (3): 308-312.IL 10濃度均升高并達到-峰值.說(shuō)明肺癌根治術(shù)后發(fā)生全5] Newrnan MS. Colbem GT. Working PK. et al. Comparative身炎性反應，隨著(zhù)促炎細胞因子的大斌釋放，抗炎細胞因子pharmacokinetics, tissue distribution, and therapeutic efec-水平亦隨之升高，而炎性細胞因子與抗炎細胞因子之間的動(dòng)tiveness of cisplatin encapsulated in long circulating, pegylated態(tài)平衡對于決定炎性反應程度是非常重要的。本研究發(fā)現，liposomnes (SP1-077) in tumor bearing mice [J] Cancer Che-肺癌根治術(shù)患者圍術(shù)期應用參麥注射液后可明顯抑制血漿促mother Pharmacol, 199， 43 (1): 1-7.6] Khan AY, Talegaonker S, Lqbal Z, et al Muliple emulsions; an炎性細胞因子lI6. TNF-a生成釋放，促進(jìn)抗炎性細胞因overview D]. Cur I)rug Deliv. 2006. 3 (4); 429-443.子IL10生成，觀(guān)察組TNF-a濃度在術(shù)后第3日已降至術(shù)前7] 王敬民，金煒，孫秀箋.參麥注射液對心力衰竭患者血ET及水平，觀(guān)察組IL-6. TNFa濃度比較在術(shù)后4h及第1日、TNF-a的影響D]浙江中西醫結合雜志，2004,0 14 (1): 46.3日均明顯低于對照組，Il-10 濃度均明顯高于對照組，提8] 鈕煒西，華寧，齊幟，等心力衰竭患者心功能的改善與參麥示參麥注射液可通過(guò)調節血漿細胞因子水平，進(jìn)而減輕肺癌注射液及血清炎癥因子水平的關(guān)系[J]. 中國臨床康復，根治術(shù)患者園術(shù)期全身炎性反應。2005. 19 (9); 134-136.綜上所述，參麥注射液給藥后可明顯抑制促炎性細胞因9]毛靜遠，王恒和，王強，等生脈注射液對心力衰竭患者血清子生成，促進(jìn)抗炎性細胞因子生成，提示參麥注射液叮通過(guò)TNF-a水平影響的臨床研究[J]新中醫， 2003, 35 (6):調節血漿細胞因子水平，從而減輕肺癌切除術(shù)患者圍術(shù)期全32-34.身炎性反應。(收稿日期: 2011-06-03; 修回日期: 2011-06-13)甲氧基聚乙二醇吡硫醇制備條件的優(yōu)化研究萬(wàn)芬'，王紅'*,昊紅菱”，蔡波濤'，馬俊' (1, 湖北中醫藥大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)教研室，武漢430065;5 2.潮北醫藥學(xué)院藥檢系，湖北十堰442000摘要:目的優(yōu)化甲氧基聚 乙二醇吡硫醇的制備條件。方法采用N羥基丁二酰亞胺活性酯法合成甲氧基聚乙二醇吡硫醇，并以紫外分光光度法測定的甲氧基聚乙二醇吡硫醇中吡硫醇的載藥量為考察指標，通過(guò)正交試驗對合成工藝進(jìn)行優(yōu)化。結果甲氧基聚乙二酵吡硫醇較優(yōu)工藝條件為: 單甲氧基聚乙二醇4000琥珀酸單酯(mPEG4K-S)與N~羥基丁二酰亞胺(NHS) 物質(zhì)的量比為1:1.5，在5 C反應2.5h后再在5 C下加入吡硫醇和4二甲氨基吡啶(DMAP)反應20h.結論該合成工藝操作簡(jiǎn)便， 穩定可行，產(chǎn)物中吡硫醇的載藥量高。關(guān)鍵詞:甲氧基聚乙二醇吡硫醇;單甲氧基聚乙二醇4000琥珀酸單酯;合成工藝;正交試驗中圈分類(lèi)號: R914, TQ460. 31文獻標識碼: A-573-04doi: 10. 3969/j. issn. 1672-2981. 2011.08. 005中國煤化工基金項目:湖北省自然科學(xué)基金資助課題(編號: 2007ABA213).MHCNMHG作者簡(jiǎn)介:萬(wàn)芬，男，在讀碩t:研究生，主要從事藥物合成新技術(shù)及新[藝研究. Tel: 13871528960， E- mail: wwffok@ 126. com*通訊作者:王紅，女教授，碩士研究生導師，主要從事藥物合成新技術(shù)及新工藝研究，E-mail: wanghonghb502@yahoo. com cn戴573.0Central South Pharmacy. August 2011, Vol. 9 No.8中南藥學(xué) 2011年8月第9卷第8期Preparation optimization of mPEG pyritinolWAN Fen', WANG Hong'"，WU Hong-ling', CAI Bo-tao', MA Jun' (1. Department of Medicinal Chemistry,College of Pharmacy, Hubei Unitversity of Chinese Medicine, Wuhan 430065; 2. Department of Laboratory Medi-cine, Hubei University of Medicine，Shiyan Hubei 442000)Abstract: Objective To optimize the preparation of methoxy polyethylene glycol ( mPEG) pyritinol. MethodsmPEG pyritinol was synthesized by N-hydroxy succinimide active ester. Drug-loading rate of the prodrugs as the indexwas measured by the UV and the synthetic process was optimized by the orthogonal test. Results The optimal condi-tions are as follows: methoxy polyethylene glylol succiate (mPEG4K S) and N-hydroxysuccinimide (NHS) (1: 1.5,n/n) reacted for 2.5hat5 C，and pyritinol and 4-dimethylamio pryidine (DMAP) were added and reacted for 20 hat5 C. Conclusion The method is simple, stable and acceptable. It shows a high drug loading rate of pyritinol in theproduct,Key words: mPEG pyritinol; mPEG4K S; synthesis; orthogonal test鹽酸吡硫醇是治療老年癡呆癥的一線(xiàn)藥物口。在臨床應SKFG- -01電熱恒溫鼓風(fēng)干燥器(湖北省黃石市醫療器械用過(guò)程中，因其半衰期(tvr) 短，口服不方便;而靜脈滴廠(chǎng)); SHB-皿循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(cháng)城科工貿有限注時(shí)，對血管黏膜有很強的刺激作用，易發(fā)生注射部位血管公司);紫外可見(jiàn)分光光度計UV- 1700 (日本島津);腫脹、疼痛、呈青紫色、樹(shù)枝狀及注射部位乃至整個(gè)上肢皮DFY-低溫恒溫反應浴(鄭州長(cháng)城儀器有限公司) ;單甲氧膚水腫、發(fā)硬、癢痛等不良反應(23。參考吡硫醇前藥方面聚乙二醇40000琥珀酸單酯(mPEG4K-S) (本實(shí)驗室自制);的報道，我們用甲氧基聚乙二醇對吡硫醇進(jìn)行修飾，合成二環(huán)已基碳酰亞胺(DCC)、 N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、吡硫醇檠乙二醇前體藥物，對目標化合物進(jìn)行了初步體外降對二甲氨基吡啶(DMAP,均為化學(xué)純，國藥集團化學(xué)試劑解和動(dòng)物刺激性實(shí)驗，證明該藥具有一定緩釋作用，并能顯有限公司);吡硫醇(含量: 98.5%， 水分: 0.17%,批號:著(zhù)減少在注射過(guò)程中對家兔的注射部位以及血管的刺激作080519，上海新云化工有限公司); N, N二甲基甲酰胺用1。為了增加吡硫醇的載藥址，使制劑成型更容易，所以(DMF)、二氯甲烷(均為分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限本文對甲氧基吡硫醇聚乙二醇的制備條件進(jìn)行了優(yōu)化。公司);乙醚(分析純，天津市德恩化學(xué)試劑有限公司)。1儀器與試劑2方法RE- 52AA旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠(chǎng));2.1 合成路線(xiàn)78HW-1型恒溫磁力攪拌器(杭州儀表電機有限公司);--CHCH.H.O-C-.H0-CHCH.CHCHCDCC0PyitinolCH0CH.CH.0fCHCH0O-CH.CH.0-C-CH.CHC -0-NDMAPHO、ρ一iCH,0CH.CHo+CH.CH.0+ CHLCH0-C-CH.CH.C -R= HO一)H1n中國煤化工CH,YHCNMHG圖1甲氧基聚乙二醇吡硫醇的合成路線(xiàn)Figl Synthesis of mPEG pyritiol“弓務(wù)數據.中南藥學(xué)2011年8月第9卷第8期Cenral South Pharmacy. August 211 Vol9 Na 82.2試驗過(guò)程其他物質(zhì)。2.21正交試驗設計參考文獻(°報道， 經(jīng)過(guò)預試驗，根3.1.2 TLC鑒別用適量DMF熔解適量的吡硫醇、目標據反應條件對產(chǎn)物的影響，選取mPEG4K-S/NHS物質(zhì)的量化合物，分別點(diǎn)樣于同一硅膠板上,用丙酮石油醚甲醇比(A)、反應時(shí)間(B)、 反應溫度(C) 三因素三水平，選(1*1:1)展開(kāi)晾干，置紫外燈(254 nm)下檢視，吡硫醇用L (3)因素水平表安排正交試驗，各因素水平見(jiàn)表1。.與目標化合物斑點(diǎn)小而清晰，且兩班點(diǎn)的R值相差較大，其中DOCC作為脫水劑，定為摩爾比mPEC4K-S-DCC= 1:說(shuō)明目標化合物是不同于吡硫醇的其他物質(zhì)。3, DMAP吡硫醇=1*1.3.1.3 UV鑒別用0.1 mol.L-"HC溶解適量的毗硫醇、表1因素水平表目標化合物，并稀釋得- 定濃度的溶液，分別在200~助1 Loved ad facdor400 m紫外掃描。結果吡硫醇的0.1 mol.L-'HC溶液在因素(factor)___(level)A (n/n)B/hCrC295. 20 nm有最大吸收，而目標化合物在297. 40 nm有最大吸收。表明目標化合物具有吡硫醇分子的基本結構:最大吸1:1.51.5一1: 1.85收波長(cháng)發(fā)生紅移，mPEG已連在吡硫醇上。112.03. 513.1.4 R表征將目標化合物和各步反應產(chǎn) 物用壓片法進(jìn)2.2.2甲氧基聚乙二醇吡硫醇的合成(3 稱(chēng)取干燥的行紅外掃描，各圖譜進(jìn)行對比，得到目標化合物可能的基mPEG4K-S4.0g (0.1 mmol)加入到100 ml.的圓底燒瓶，團: 3525.4 cm' (r0H)， 為羥基伸縮振動(dòng); 1 735.68加入50 mLDMF在5C攪拌10 min溶解，依次加入NHScm'! (v00-)，為酯羰基上的羰基伸縮振動(dòng); 1 455.320.17g (0. 15 mmol)和DCC0.62g (0.3 mmo),在5 C攪cm-'、1349.52 mi'.1 297.18 cm~'. 949.67 (r (CH2)拌反應2.5h.然后依次加人毗碗醇和DMAP,繼續在5Cn)，均為聚乙二醇上的碳骨架伸縮振動(dòng); 1 108.25∞m~1下反應20h.停止反應，反應液過(guò)謔，濾液在快速攪拌下加(wmC0C-),為醚鍵不對稱(chēng)伸縮振動(dòng); 2 869.5m~ (r人180 mL冷乙醚，攪拌5 min后置冰箱中靜置30 min,過(guò)CH.吡啶環(huán)上),為吡啶環(huán)上的碳氫伸縮振動(dòng)，表明吡硫醇濾得淺米黃色固體，將固體用30 ml.水溶解，過(guò)濾，濾液接到了mPEG4K-S上。用二氯甲烷萃取(35 mLX3),然后用1 mol.L-'HC洗二3.L.5 HNMR表征由于 mPBC4K-S分子量及氫原子的氯甲烷萃取液(10 mLX2),再用水洗二氯甲烷萃取液個(gè)數遠超過(guò)所載的吡硫醇。所以在圖譜上很難看到吡硫醇的(15 mLX2)。加人無(wú)水硫酸鈉干燥，密封靜置過(guò)夜。逮除氫的信號，無(wú)法準確積分氫的個(gè)數。各氫的化學(xué)位移(8) 如干燥劑，濾液用0. 45 pum微孔濾膜過(guò)濾，濾液濃縮，快速攪下: 2.6~2.8 p(CH-CHC-0-40-3.3~3.4 ppm拌下加入冷無(wú)水乙醚沉淀產(chǎn)物，過(guò)濾，抽干，P,O真空干(0CH)，3.4~3.8 ppm (0CH-), 4.2~4.3 (CH-CO-燥，得淺米黃色結晶性粉末，mp56.8~59.1 C,稱(chēng)重并用0-).3.2結果及分析紫外分光光度法(01)測定產(chǎn)物中吡硫醇的載藥量。3結果將表]按L (3)正交表所列條件及“2.2.2” 項下條.1 表征件進(jìn)行3次平行實(shí)驗，計算得到的載藥量取平均值。正交分3.1.1 m測定用毛細管熔點(diǎn)儀測定目標化合物和吡硫醇析所用正交表表2各列除因素列外，空白列D作對照。極的熔點(diǎn)，測得目標化合物mp56.8~59.1c,遠低于吡硫醇差分析分析數據和計算結果見(jiàn)表3。的mp215.9~217.7 C,推斷目標化合物是不同于吡硫醇的表2三因素三水平正交實(shí)驗設計與結果助2 Othgral deshgnodIo (3) and epertiment data實(shí)驗號產(chǎn)物量毗硫醇含t載藥量(test number)(produc) /8__ (pritio conten) 1% (oading rnte) 82.300.04522.354.260. 1001.171.962.910.0572.282.410.0552.630.0611.760. 03934. 200. 0960.089K0.1780.1410. 2020. 18S中國煤化工0.1730.2510.2460.200MYHCNMHG0. 2240.1830. 1270. 186_R0. 0170.0370.0400.005[575