肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影響因素研究

江蘇農業(yè)科學(xué)2009年第1期肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影響因素研究吳海虹,玄國東2,劉春泉(1江蘇省農業(yè)科學(xué)院農產(chǎn)品加工研究所江蘇南京2100142山東省產(chǎn)品質(zhì)量監督檢驗研究院,山東濟南250100)摘要:以松果菊苷為標準品,采用紫外分光光度法測定了鹽生肉蓯蓉中苯乙醇苷類(lèi)化合物的含量同時(shí)對影響肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取的反應溫度、乙醇體積分數料液比、提取時(shí)間以及提取次數等5個(gè)因素進(jìn)行了分析確定了較佳工藝條件。結果表明肉蓯蓉中苯乙醇苷類(lèi)化合物的較佳提取條件為溫度70℃,料液比1:10,乙醇體積分數80%,提取時(shí)間2h,提取次數2次。關(guān)鍵詞:肉蓯蓉;苯乙醇苷;影響因素;提取工藝中圖分類(lèi)號:R284.1文獻標志碼:A文章編號:1002-1302(2009)01-0250-03肉蓯蓉屬多年生根寄生草本植物是名貴中藥材,具有補為40目,備用腎、益精、潤腸、抗衰老等功效,由于生長(cháng)于沙漠環(huán)境,又有1.2.2松果菊苷測定波長(cháng)的選擇稱(chēng)取松果菊苷1.5mg“沙漠人參”之美譽(yù)。國內外學(xué)者對肉蓯蓉的化學(xué)成分進(jìn)行置于50m容量瓶中用甲醇定容至刻度,搖勻在波長(cháng)為230了大量研究迄今為止已經(jīng)分離出約近70種化合物包括苯-450m范圍內進(jìn)行紫外掃描。如圖1所示,在波長(cháng)為270乙醇苷類(lèi)、環(huán)烯醚萜類(lèi)、木脂素類(lèi)化合物以及生物堿和糖類(lèi)等400mm范圍內,松果菊苷均有紫外吸收,其中338m處紫其他成分。其中最主要成分為苯乙醇苷類(lèi)化合物,以B-外吸收值最高因此在試驗研究中選定該波長(cháng)進(jìn)行松果菊苷葡萄糖為母核的含有酯鍵及氧苷鍵的天然糖苷,廣泛存在于標準曲線(xiàn)的繪制。雙子葉植物中,是由苯乙基咖啡?；投鄠€(gè)糖基組成的一類(lèi)分子量較大、結構相似的水溶性物質(zhì)2,根據其取代基的不同,可分為肉蓯蓉苷(A、B、C、D)、類(lèi)葉升麻苷、松果菊苷等。Sao等“藥理學(xué)研究證明,類(lèi)葉升麻苷肉蓯蓉苷A和C、松果菊苷等能顯著(zhù)提高小鼠的性功能,并能增強記憶力。本試驗通過(guò)對鹽生肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇冋流提取的影響因素進(jìn)行分析,找出了苯乙醇苷類(lèi)化合物的較佳提取條件,為苯乙醇苷類(lèi)化合物開(kāi)發(fā)利用提供一定的科學(xué)依據。1材料與方法230263296329362428450波長(cháng)(m)1.1材料、試劑與儀器圖!松果菊苷光譜掃描圖譜材料:鹽生肉蓯蓉內蒙古磴口縣產(chǎn)。1.23標準曲線(xiàn)繪制稱(chēng)取松果菊苷標準品20mg,置50ml試劑:松果菊苷標準品(中國藥品生物制品檢定所純度容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度搖勻。分別吸取上述溶≥99%);D101型大孔吸附樹(shù)脂(天津南開(kāi)大學(xué)化工廠(chǎng));甲液0.20.40.6、0.8、1.0、12、1.4、16、1,8、2.0ml置于25醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯等均為國產(chǎn)分析純ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。以甲醇作測定空白,在主要儀器:TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(北京普析通38mm波長(cháng)測定紫外吸收度(圖2)。經(jīng)線(xiàn)性回歸處理得標用儀器有限責任公司);FW-100高速萬(wàn)能粉碎機(北京中興準曲線(xiàn):y=46.785x+1.1447。在該方程中,x表示吸光度值偉業(yè)儀器有限公司);FA2104型電子分析天平(上海恒平科(OD值),y表示松果菊苷含量(ug/ml)。該方程的回歸系數學(xué)儀器有限公司);標準分樣篩(浙江上虞道墟路達儀器廠(chǎng));r=0.996,說(shuō)明自變量與因變量之間存在高度的相關(guān)關(guān)系,HH-S恒溫水浴鍋(江蘇金壇恒豐儀器廠(chǎng));YXJ-A高速大25「y=46785x+1.1447容量電動(dòng)離心機(江蘇金壇環(huán)字科學(xué)儀器廠(chǎng))。r=099931.2試驗方法1.2.1原料的預處理將烘干的肉蓯蓉進(jìn)行粉碎粉碎粒度收稿日期:2008-11-25基金項目:江蘇省農業(yè)科學(xué)院科研基金(編號:6510605)作者簡(jiǎn)介:吳海虹(1976—),女,江蘇儀征人,碩土,研究方向為天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)。E-mlil:wuhaihongl69@163.com。通訊作者:劉春泉,研究員。Tel:(025)84391255;E- mail: Icq@j,OD值圖2紫外分光光度法松果菊苷標準曲線(xiàn)吳海虹等:肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影響因素研究251可以作為松果菊苷的標準曲線(xiàn)使用。1.2.4樣品測定稱(chēng)取肉蓯蓉樣品10.00g(共4份),用70%乙醇回流提取3次,乙醇用量分別為30ml、20ml、20ml30每次1.5h。合并提取液減壓回收乙醇,膏狀物用水10ml混合,用水飽和的乙酸乙酯脫脂3次(每次乙酸乙酯用量為10m),水層再用水飽和的正丁醇萃取3次(每次正丁醇用量為10ml)。合并3次正丁醇萃取液減壓回收正丁醇所得稠膏用水5m溶解加入裝有15ml的D01的大孔樹(shù)脂柱頂端反應溫度(℃分別用水50m、甲醇50ml洗脫收集甲醇洗脫液45m,并用圖3反應溫度對肉蓯蓉苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響甲醇定容至50ml。精密吸取02ml,甲醇定容至25ml,搖勻,為1:14時(shí),苯乙醇苷類(lèi)化合物濃度為34.18μg/ml,僅增加在338m處測定吸收值按松果菊苷問(wèn)歸方程計算含量2.25μg/m。該結果說(shuō)明比較適合的料液比應大于1:101.2.5肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取蟛響因素研究但考慮到提取溶劑的用量及成本因素,認為料液比選擇1:10125.1反應溫度對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱(chēng)比較適合。取5.0g肉蓯蓉干粉加入70%乙醇溶液70ml,于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃恒溫加熱回流提取2:0h,提取液經(jīng)濃縮分離之后測定苯乙醇苷類(lèi)化合物的含量。25.2乙醇體積分數對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響5050稱(chēng)取50g肉蓯蓉干粉,分別加入70m體積分數為50%60%、70%、80%、90%、95%的乙醇溶液,于70℃恒溫加熱回百爛能N撇流提取,提取時(shí)間及濃縮分離方法同上測定苯乙醇苷類(lèi)化合物的含量1:61:81:101:12I:141.2.5.3料液比對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱(chēng)取50g肉蓯蓉干粉,分別按料液比為1:6、1:8.1:10、1:12、田4料液比對肉蓯蓉苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響1:14加入體積分數70%的乙醇70ml,提取時(shí)間及濃縮分離2.3乙醇體積分數對笨乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響方法同上,測定苯乙醇苷類(lèi)化合物的含量圖5顯示,在乙醇體積分數為50%-80%范圍內,隨著(zhù)1.z.5.4提取時(shí)間對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱(chēng)乙醇體積分數提高提取液中苯乙醇苷類(lèi)化合物濃度也增加取5.0g肉蓯蓉干粉,分別加入體積分數為70%的乙醇70濃度范圍為27.72-32.44ug/ml,且在該范圍內提取液中苯皿l,并于T0℃恒溫加熱回流提取L.0、1.5、,2,0、2.5、3.0、3.5、乙醇苷類(lèi)化合物濃度的增加不明顯,說(shuō)明乙醇體積分數為40h,濃縮分離方法同上測定苯乙醇苷類(lèi)化合物的含量。50%-80%對苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響不明顯。乙1.2.5.5提取次數對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱(chēng)醇體積分數超過(guò)80%之后,提取液中苯乙醇背類(lèi)化合物濃度取5.0g肉蓯蓉干粉,分別加入體積分數為70%的乙醇70開(kāi)始下降,至乙醇體積分數為95%時(shí),提取液中苯乙醇苷類(lèi)m,并于70℃恒溫加熱回流提取2h,提取次數分別為1次、2化合物濃度下降至18.27μg/ml,說(shuō)明乙醇體積分數超過(guò)次3次4次,合并提取液濃縮分離方法同上測定苯乙醇苷80%之后對苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響比較大。因類(lèi)化合物的含量。此,乙醇體積分數選擇80%比較適合。2結果與分析2.1反應溫度對苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響30如圖3所示,在反應溫度為40~70℃范圍內隨著(zhù)反應溫度升高提取液中苯乙醇苷類(lèi)化合物濃度也增加濃度范圍20為30.19~329μ/m,變化比較小,說(shuō)明在該溫度范圍內反應溫度對苯乙醇苷類(lèi)化合物提取的影響不明顯。但反應溫度超過(guò)70℃之后隨著(zhù)反應溫度升高提取液中苯乙醇苷類(lèi)化合物濃度降低。說(shuō)明反應溫度超過(guò)70℃之后,不利于苯乙醇苷類(lèi)化合物提取。綜合考慮各個(gè)因素之后,認為選擇反應乙醇體積分數(%圖5乙醇體積分數對肉蓯蓉苯乙酵苷類(lèi)化合物提取效果的影響溫度70℃比較適合。2.2料液比對苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的彩響24提取時(shí)間對苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的形響圖4顯示,在反應料液比為1:6-1:14的范圍內,隨著(zhù)由圖6可見(jiàn),反應時(shí)間為1-4h范圍內隨著(zhù)反應時(shí)間料液比的提高提取液中苯乙醇苷類(lèi)化合物濃度也增加但在延長(cháng)提取液中苯乙醇苷類(lèi)化合物濃度也增加濃度范圍為1:6-1:10的范圍內提取液中苯乙醇苷類(lèi)化合物濃度增加32.25-35.91g/ml,在整個(gè)反應時(shí)間范圍內提取液中苯乙比較迅速濃度為21.8-3193ug/ml;當料液比超過(guò)1:10醇苷類(lèi)化合物濃度增加幅度很小,波動(dòng)幅度僅為3.66之后提取液中苯乙醇苷類(lèi)化合物濃度增加較緩慢至料液比μg/m。說(shuō)明當提取反應超過(guò)1b之后對苯乙醇苷類(lèi)化合物江蘇農業(yè)科學(xué)2009年第1期3結論鹽生肉叢蓉經(jīng)乙醇回流提取、濃縮、乙酸乙酯脫脂和正丁醇萃取有效成分等步驟,再經(jīng)大孔樹(shù)脂D0吸附,甲醇洗脫采用紫外分光光度法測定肉叢蓉中苯乙醇苷類(lèi)化合物的含量。經(jīng)線(xiàn)性回歸處理得標準曲線(xiàn)為y=46.785x+1.1447。在該方程中x表示吸光度值(OD值),y表示松果菊苷含量提取時(shí)間(h)(μg/m)。該方程的回歸系數為0.9996,說(shuō)明自變t與因變6提取時(shí)間對肉蓯蓉苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響量之間存在高度的相關(guān)關(guān)系,可以作為松果菊苷的標準曲線(xiàn)提取效果的影響不大因此比較適合的提取時(shí)間為2h使用2.5提取次數對苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響對肉蓯蓉苯乙醇苷回流提取影響因素的試驗研究表明由圖7可見(jiàn),在提取次數為1~4次范圍內隨著(zhù)提取次反應溫度選擇70℃、乙醇體積分數選擇80%,提取料液比選數的增加提取液中苯乙醇苷類(lèi)化合物濃度增加比較顯著(zhù)濃擇1:10、提取時(shí)間選擇2h提取次數選擇2次比較適合。度范圍為31.55-5229μg/ml,增加幅度為20.74g/ml。說(shuō)考文獻明提取次數對苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響比較大,但過(guò)多的提取次數將消耗很多時(shí)間及能源,綜合考慮認為比較[1劉秀華,李蕓,張晶.肉蓯蓉屬植物的化學(xué)成分研究進(jìn)展適合的提取次數為2次。J.蘭州醫學(xué)院學(xué)報,2004,30(3):96-97[2]靖會(huì ),佐建鋒,李教社.苯乙醇苷類(lèi)化合物的藥理研究進(jìn)展.時(shí)珍國醫國藥,2006,17(3):410-441[3]宋志宏屠鵬飛,趙玉英,管花內蓯蓉的苯乙醇苷成分[門(mén).中草藥,2000,31(11):808-810.[4]Sato A, Kozima S, Kobayashi K. Pharmacological studies onhis herba. I Eects of the constituents of cistanchis herbaand leaming behavior in chronic stressed mice[J]. Yakugakuzasshi,1985,105(12):1134-113提取次數圖7提取次數對肉蓯蓉苯乙醇苷類(lèi)化合物提取效果的影響歡迎訂閱2009年《江蘇農業(yè)科學(xué)》郵發(fā)代號:28-10《江蘇農業(yè)科學(xué)》是由江蘇省農業(yè)科學(xué)院主辦的綜合性農業(yè)科技期刊為雙核心期刊(中國科技核心期刊全國中文核心期刊),榮獲第三屆國家期刊獎提名獎第二屆國家期刊獎百種重點(diǎn)期刊獎全國優(yōu)秀科技期刊、江蘇省雙十佳期刊江蘇省優(yōu)秀期刊全國農口學(xué)會(huì )優(yōu)秀期刊、華東地區優(yōu)秀期利等。主要刊登國內最新農業(yè)科技創(chuàng )新和研究成果方面的研究論文時(shí)效性強發(fā)表周期短適合農業(yè)科研人員、農業(yè)行政管理人員農業(yè)技術(shù)推廣人員、農業(yè)企業(yè)管理人員、生物與農業(yè)院校師生以及農民等閱讀?！督K農業(yè)科學(xué)》刊載的文章科學(xué)性強、論證嚴謹,在學(xué)術(shù)上多有新的見(jiàn)解與發(fā)展,而且通俗易懂,是您從事農業(yè)科研、農技推廣、農業(yè)管理跟蹤農業(yè)科技,實(shí)現科學(xué)致富的良師益友。工蘇農業(yè)科學(xué))是雙月刊逢雙月15日出版大16開(kāi)320頁(yè)。國內外公開(kāi)發(fā)行,刊號:cN32-1418012(國際,郵發(fā)代號:28-0.每期定價(jià)20元全年10元半600地址:南京市孝陵衛鐘靈街50號郵編:20014網(wǎng)址:hp:/ jsnykx.. Jaas. ac.cn電話(huà):(025)8439028mail; nykx@ jaas, ac cn